基于免疫组库测序技术的淋巴瘤B细胞受体研究

Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) is the most common type of B-cell lymphoma with a high incidence ratio. Its morphology, immunophenotype, genetics and clinical manifestations was significantly different. The prognosis of recurrent DLBCL patients with different immune phenotype is very different. DLBCL is caused by abnormal development of B cells. In view of the above situation, we speculated that B cells polymorphism might be related with the development of this disease, and might directly affect the response of cancer patients to drug treatment and prognosis. By using immune repertoire sequencing techniques, we could analyze the molecular characteristics of cancer patients’ immune repertoire from the overall level. This technology has been apply to minimal residual disease (MID) monitoring and treatment evaluation and evaluating prognosis and biomarker discovery, etc. In this study, we intend to take advantage of immune repertoire sequencing technology to investigate the mechanisms of recurrent DLBCL. By analyzing the diversity of B cell receptor (BCR), we may get a whole sight of BCR characteristics of recurrent DLBCL, exploring the links between BCR and prognosis of recurrent DLBCL patients. By analyzing the dominant BCR sequences, we expect to find out some characteristic sequences, which may be the new markers for clinical diagnosis or treatment monitoring, and will provide the new molecular targets for therapeutic antibody development. Further analysis of the relationship between recurrent DLBCL and immune repertoire may be significant for the mechanisms study of recurrent DLBCL.

弥漫性大B细胞淋巴瘤是最常见的非霍奇金淋巴瘤，其形态学、免疫表型、遗传学和临床表现都具有明显的异质性，不同免疫表型的患者其预后具有极大的差异。弥漫性大B细胞淋巴瘤是由B细胞发育异常引发的。针对以上情况，我们推测B细胞多态性可能与弥漫性大B细胞淋巴瘤的发生发展相关，并直接影响患者对药物治疗的反应及预后。免疫组库测序技术已应用于某些疾病的微小残留监测、疗效评估、预后监测及生物标志物的发现等方面。而该技术应用于弥漫性大B细胞淋巴瘤却鲜有报道。本研究应用免疫组库测序技术研究弥漫性大B细胞淋巴瘤的复发机制，通过分析B细胞受体的多样性，描绘该疾病的B细胞受体特征谱，探讨B细胞受体与复发患者预后之间的联系；通过挖掘疾病优势序列，发现B细胞受体特征性序列，为临床监测病情变化提供新的标志物，为研发药物提供新的靶点；通过深入研究复发弥漫性大B细胞淋巴瘤与免疫组库间的联系，对阐明该病的复发机制具有重要意义。

弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是最常见的非霍奇金淋巴瘤，由B细胞发育异常引发，推测B细胞受体（BCR）多态性可能与DLBCL的发生发展相关。免疫组库测序技术已应用于某些疾病的疗效评估、预后监测及生物标志物的发现等方面，而应用于DLBCL却鲜有报道。本研究主要通过BCR免疫组库测序和全外显子组测序（WES），检测DLBCL中BCR的多样性、探讨BCR与临床和预后指标之间的联系；通过挖掘疾病优势序列，发现特征性CDR3序列，为临床监测病情变化提供新的标志物；通过深入研究DLBCL与免疫组库和基因突变间的联系，阐明该病的发生发展的分子机制。.研究结果表明，DLBCL患者的BCR多样性、VJ组合、平均氨基酸数量与对照组相比均较低，说明DLBCL患者的免疫状态较差。比较发现，高多样性的DLBCL患者PFS明显短于低多样性患者（P=0.018）。此外，在DLBCL患者中，发现了4个与PFS相关的CDR3（IGHV1-8/IGHJ6、IGHV3-74/IGHJ6、IGHV4-39/IGHJ3和IGHV4-34/IGHJ4）、1个HBV感染相关CDR3（IGHV4-39/IGHJ4）和2个转移相关CDR3（IGHV4-34/IGHJ4和IGHV4-39/IGHJ3），这些BCR序列可作为DLBCL患者预后的免疫指标。.进一步对BCR进行聚类分析，将患者分为cluster 1和cluster 2，2组患者的PFS（P=0.004）、OS（P=0.020）和转移率（0 vs. 80%，P=0.010）均存在显著差异，但传统分型中未发现统计学差异。进一步比较化疗后的生存情况，cluster 1组的患者的PFS（P=0.004）和OS（P=0.043）显著高于cluster 2组，说明我们模型能准确地预测化疗后患者的预后。.我们利用WES数据分析DLBCL患者的基因突变，表明BCR分布与2个转移相关通路密切相关。FTSJ3、MAGED2和ODF3L2基因在cluster 2的所有患者中发生突变，被认为是潜在的关键基因，可能导致两个聚类的不同预后。.通过分析DLBCL患者BCR库的多样性，发现特征性CDR3序列，进而与突变特征相结合，为临床预测患者预后提供新的方法和标志物，也为DLBCL的发展机制研究提供基础，具有重要的临床应用及基础研究价值，对临床预测DLBCL预后具有重要意义。