Vγ2Vδ2+T细胞功能改变在类风湿性关节炎患者结核发病中的免疫作用机制研究

The reported frequency of tuberculosis among rheumatoid arthritis (RA) patients treated with infliximab was significantly higher than the available background rates.As we know, the change of host cellullar immune function is one of the major pathogenesis of tuberculosis. Our previous study in patients with latent and active tuberculosis has found that Vγ2Vδ2+T cells contribute to protective immune response against Mycobacterium tuberculosis. Recently, it has been reported that the immune response of Vγ2Vδ2+T cells from RA patients was inhibited by the exposure to infliximab in vitro. Therefore, we hypothesize that increasing frequency of tuberculosis among RA patients might be of great relevance with the immune functional changes of Vγ2Vδ2+T cells regulated by TNF-alpha blocker infliximab. To prove this hypothesis, a case control study will be designed to evaluate the immune response of Vγ2Vδ2+T cells from healthy controls and from RA patients prior to initiation of infliximab therapy. Then the RA patients receiving infliximab therapy will be regular followed to assess TB incidence and the immune functional changes of Vγ2Vδ2+T cells in vivo. Flow cytometry, MACS cell separation, lymphocyte proliferation, intracellular cytokine staining (ICS) and real-time PCR will be employed to investigate the effect of TNF-alpha blocker infliximab on the immune function of Vγ2Vδ2+T cells and to interpret the immunopathogenesis of tuberculosis among RA patients receiving treatment with infliximab. These results will help to develope a new immunotherapeutic strategy for tuberculosis among RA patients.

临床研究已证实类风湿性关节炎患者在英夫利西单抗治疗后结核发病率显著升高。宿主细胞免疫功能改变是结核病重要发病机制之一。我们的前期研究发现，Vγ2Vδ2+T细胞免疫应答功能在结核免疫发病机制中有重要作用。而新近研究发现英夫利西单抗在体外可抑制γδT细胞免疫反应。因此，我们推测英夫利西单抗参与调控的Vγ2Vδ2+T细胞免疫功能改变在类风关患者结核发病中起关键作用。本课题拟采用病例对照研究比较英夫利西单抗治疗前类风关患者和健康人的γδT细胞免疫功能；然后对使用英夫利西单抗治疗的类风关患者定期随访评估结核发病情况，并以流式细胞检测、磁珠分选、淋巴细胞增殖实验、细胞内细胞因子染色及Real-time PCR等技术对英夫利西单抗如何调控Vγ2Vδ2+T细胞功能进行研究。本课题研究结果将初步阐明Vγ2Vδ2+T细胞功能改变在类风关患者结核发病中的免疫作用机制，有望开发以该细胞为靶位的新型抗结核免疫策略。

临床研究证实风湿病患者在TNF-α拮抗剂治疗后结核发病率显著升高。我们的前期研究发现，Vγ2Vδ2+T细胞免疫应答功能在结核免疫发病机制中发挥重要保护作用。因此，为探索TNF-α拮抗剂调控的Vγ2Vδ2+T细胞免疫功能改变在风湿病患者结核发病机制中的作用，本课题进行了病例对照研究和前瞻性随访研究。病例对照研究中，共入选294例未接受TNF-α拮抗剂治疗且明确诊断的风湿病患者和57例近期无活动性结核暴露史的健康对照者。结果发现，风湿病患者的基线潜伏结核感染率要高于健康对照者（27.2% vs. 20.8%），而近期接受糖皮质激素治疗的风湿病患者较未接受激素治疗者潜伏结核感染率明显增高（38.3% vs. 24.4%，OR值1.93，P=0.032）。对入选者基线时外周血Vγ2Vδ2+T细胞功能进行比较，结果发现，风湿病患者组的HMBPP抗原特异性Vγ2Vδ2+T细胞免疫应答反应要显著低于健康对照组，说明在接受TNF-α拮抗剂治疗之前，风湿病患者受疾病本身影响或接受激素等其他免疫抑制治疗后导致Vγ2Vδ2+T细胞抗结核免疫功能失调，使得该类高危人群更易感染潜伏性结核。在前瞻性随访研究中，共入选风湿性疾病患者101例（其中接受TNF-α拮抗剂治疗的风湿病患者65例，未接受TNF-α拮抗剂治疗的风湿病患者36例）。对入选者每6个月随访一次，结果发现TSPOT阳性率呈逐渐下降趋势（46.5% vs. 40.4% vs. 36.7%），但接受TNF-α拮抗剂治疗组有4例患者在末次随访时发生了TSPOT结果的阳转，提示TNF-α拮抗剂治疗会增加风湿病患者的结核感染风险。进一步的T细胞功能试验结果发现，与未接受TNF-α拮抗剂治疗组相比，TNF-α拮抗剂治疗组其Vγ2Vδ2+T细胞在接受特异性抗原刺激后的增殖能力和分泌IFN-γ、perforin、granulysin及granzyme等效应细胞因子的功能均有明显降低，提示TNF-α拮抗剂治疗可下调Vγ2Vδ2+T细胞的抗结核免疫应答反应。因此，TNF-α拮抗剂参与调控的Vγ2Vδ2+T细胞免疫应答功能受损在风湿病患者结核发病中起着至关重要的作用，以Vγ2Vδ2+T细胞为靶位进行免疫调控有望在接受TNF-α拮抗剂治疗的风湿病患者高危人群中降低结核发病风险。