吗啉反义寡核苷酸治疗α1-抗胰蛋白酶pittsburg突变的策略研究

α1-antitrypsin (A1AT) Pittsburg was caused by Met 358 to Arg substitution at the reactive Met358-Ser359 site, which became similar to the reactive Arg393-Ser394 site of antithrombin. As a result, this mutant caused bleeding tendency, which was a typical model of acquired function by mutation. Unfortunately, there was no effective treatment but the uneffective replacement therapy up to now. We plan to use morphodiamidate morpholino oligomers (PMO) as a method to block the translation of A1AT at the mRNA level. To gain the safe and efficient PMO, we intend to construct cell and mouse model by CRISPR-CAS9 or transegene technology respectively. Using the real-time RT-PCR and ELISA/Weatern Blot, we will gain efficient PMO. Then the conresponding vivo-PMO was injected into the mouse to test the safety and effective by coagulation and thromosis. This study will provide us new ideas and theoretical basis to improve the precision medicine of bleeding disorders.

α1-抗胰蛋白酶（α1-antitrypsin, A1AT）Pittsburg突变是由于A1AT 的358位甲硫氨酸被精氨酸取代，使其抗胰蛋白酶活性消失而表现为强烈的抗凝血酶活性。该疾病是一类由突变导致功能性疾病的理想模式，目前以替代治疗为主且效果不佳，尚无其他有效的治疗方案。本课题拟采用吗啉反义寡核苷酸（PMO）在mRNA水平特异性阻断突变蛋白的表达，达到治疗的目的。为此我们将建立A1AT Pittsburg突变细胞模型及转基因小鼠模型，通过检测细胞模型中A1AT mRNA和蛋白变化筛选出抑制效果明显的PMO，再注射到小鼠体内，通过检测蛋白含量、凝血功能及血栓形成的变化来评估疗效，筛选出安全有效的PMO。本研究以典型的A1AT Pittsburg突变疾病为模型探讨PMO的疗效，这将为研究出血性疾病的精准治疗提供新的思路及理论依据。

α1-抗胰蛋白酶（α1-antitrypsin, A1AT）Pittsburgh突变是由于A1AT 的358位甲硫氨酸被精氨酸取代，使其抗胰蛋白酶活性消失而表现为强烈的抗凝血酶活性的一类罕见的出血性疾病。该疾病是由突变导致获得性功能疾病的理想模式，目前以替代治疗为主且效果不佳，发病时尚无其他有效的治疗方案。为此本研究收集到8例A1AT Pittsburgh 突变患者并通过基因诊断确诊，明确了该类疾病的特殊的临床及实验室特征，并建立A1AT Pittsburgh突变细胞模型及转基因小鼠模型，进一步验证突变蛋白突变蛋白具有抗凝作用。证实止血药物蛇毒制剂巴曲亭可缩短患者血浆TT促进患者血浆凝固，出血时可考虑可短期应用。此外，通过计算机对接及大数据分析从Drugbank数据库中选出筛选出22种上市及在研的药物可能对A1AT基因M358R突变部位有抑制作用的潜在药物。本研究以典型的A1AT Pittsburgh突变疾病为模型,为研究出血性疾病的精准治疗提供新的思路及理论依据。