辣椒素结肠最适吸收的转运机制及对肠道区段释药系统构建的评价

我们用大鼠肠道不同区段定位研究发现，辣椒素在胃肠道吸收存在部位差异，在结肠部位的吸收显著性大于空肠和回肠。由于胃肠道转运是药物口服吸收的第一步，清楚地了解药物在胃肠道的转运机制吸收特性，并对肠道内转运蛋白与药物间的相互作用关系进行解析，有助于合理地选择药物剂型和给药部位。我们拟通过研究辣椒素与肠黏膜上辣椒素受体（TRPV1）间的相互作用，与肠粘膜上P-糖蛋白（P-gp），多药耐药相关蛋白（MRP2）及乳腺癌耐药蛋白（Bcrp）间的相互作用及对旁细胞途径紧密连接（TJ）屏障的影响，阐明辣椒素结肠最适吸收的转运机理，并对辣椒素结构同源性药物进行比较研究，从而为发现具有肠内特异吸收药物转运机制规律性的差异奠定基础。并通过构建辣椒素结肠定位给药系统，以结肠癌原位裸鼠模型的治疗效果作为验证，进一步证明药物在胃肠道区段吸收差异对于口服新剂型设计时的权重地位。

基于许多食材中均含有辣椒素，且服药期间忌辛辣的说法，故有必要了解辣椒素的经肠转运机制。首先我们建立了高效液相检测方法，检测体外经肠粘膜透过的样品中辣椒素的含量。使用体外Ussing chamber实验评价辣椒素经不同肠段透过的差异，对不同区段吸收-分泌（M-S）方向进行分析显示，辣椒素经不同肠段透过有显著性差异，表现为结肠＞回肠＞空肠。而分泌-吸收（S-M）方向的Papp进行分析显示，经不同肠段S-M方向透过具有显著性差异。上述统计结果表明辣椒素体外在结肠段具有特异性透过的特性。应用荧光分光光度计，建立荧光素钠（CF）检测方法。在研究辣椒素对CF经空、回和结肠粘膜M-S方向和S-M方向的影响时发现，辣椒素能提高CF经空肠粘膜双向透过性。但是对回肠和结肠的粘膜透过无作用。说明，辣椒素可能打开了空肠粘膜上的紧密连接，从而使得经旁细胞通道透过的CF的肠粘膜双向透过增加。在完成2h体外透过实验后，分别用LDH试剂盒检测了辣椒素存在或不存在情况下的LDH水平。从空肠，回肠和结肠释放的LDH分别于与对照组相比均没有显著性差异，说明辣椒素没有引起各段肠粘膜的损伤。为考察TRPV1在辣椒素经肠粘膜透过中的作用，使用TRPV1通道竞争性抑制剂钌红（RR）与辣椒素同时进行体外透过。结果显示， 20μM RR组显著降低了辣椒素经结肠的双向透过，而10μM RR组仅降低了结肠粘膜M-S方向的透过。对照组中三肠段间M-S方向上的Papp具有显著性差异，此差异仅出现在结肠和空肠，结肠和回肠，而10μM和20μM组并没有此差异。这说明钌红能通过抑制TRPV1改变了辣椒素经肠粘膜透过的特性。在研究多药耐药蛋白P-gp、MRP2和BCRP对辣椒素经肠粘膜转运的影响中，发现P-gp和MRP2没有改变辣椒素经三个肠段吸收方向特异性透过特性。然而意外发现，本应能够通过抑制BCRP这种外排蛋白而增加其底物的透过的新生霉素，却使辣椒素在所有肠段吸收方向的透过均有降低的趋势，尤其是在回肠和结肠吸收方向的透过显著降低。在体In situ实验，建立LC-MS/MS法测定辣椒素经不同肠段吸收后的血药浓度，发现结肠的曲线下面积AUC0-240min和最高血浆浓度Cmax的平均值大于回肠和空肠，但无统计学意义。体内研究结果并没有出现体外研究中所呈现的具有显著性的结肠特异性吸收特性。