RASSF1A基因在上尿路尿路上皮癌膀胱复发中的表观遗传学改变及分子机制研究

Upper tract urothelial carcinoma is a malignant tumor differentiated from the urothelial cells of ureters and pelvis. It was demonstrated in our previous study, the UTUC biologic and clinical characteristics was quite different from Chinese and western population, and the main cause was the nationwide use of aristolochic acid containing herbs. High bladder recurrence rate, high frequency of bladder recurrence and significant relationships between methylated RASSF1A gene and bladder recurrence were the three most typical characteristics of Chinese UTUC patients. On the basis of our previous large scale epigenetics UTUC study, we focus on the RASSF1A gene promoter methylated status of the primary tumor, first bladder recurrence samples and the second bladder recurrence samples in this study. We will evaluated the methylation status of RASSF1A and analyze its downstream protein expression. We also analyze the mechanism of RASFF1A methylation to regulate tumor stem cells and RAS signal pathway in our study. We would like to figure out the detailed epigenetic mechanism of RASSF1A gene in the recurrence progression of UTUC patients and explore the new methods or drugs to prevent bladder recurrence for UTUC patients.

上尿路尿路上皮癌(upper tract urothelial carcinoma, UTUC)是起源于肾盂及输尿管尿路上皮细胞的恶性肿瘤。由于含马兜铃酸药物的使用，中国人群UTUC具有同西方人群明显不同的生物学及临床特征。其中，膀胱肿瘤复发率高、复发次数多以及肿瘤复发同原发病灶RASSF1A启动子区域甲基化状态相关是该疾病的三个显著特征。本研究在前期大数据量研究的基础上，进行如下探索：①对UTUC原发灶、膀胱初次复发灶、二次复发灶进行RASSF1A基因启动子区域甲基化检测，明确该基因甲基化在不同复发时期的变化规律及临床意义②研究RASSF1A甲基化对UTUC肿瘤干细胞的调控机制③探索RASSF1A甲基化对RAS信号通路的调控作用。通过上述方法，拟最终明确RASSF1A异常甲基化调控UTUC术后膀胱复发的详细机制，探索减少UTUC复发的新药物、新方法，以期降低复发率，改善临床预后。

上尿路尿路上皮癌(Upper tract urothelial carcinoma, UTUC)是起源于肾盂及输尿管尿路上皮细胞的恶性肿瘤。由于含马兜铃酸药物的使用，中国人群UTUC具有同西方人群明显不同的生物学及临床特征。其中，膀胱肿瘤复发率高、复发次数多以及肿瘤复发同原发病灶RASSF1A启动子区域甲基化状态相关是该疾病的三个显著特征。在本课题执行过程中，我们设计了临床和基础两大部分研究针对RASSF1A基因启动子区域甲基化状态和UTUC复发及恶性程度进行了专门的探索。在临床研究方面，我们在回顾性研究中检测了该基因在UTUC原发灶、初次膀胱复发灶、二次膀胱复发灶中的甲基化比例，但未发现明显差异；同时，我们针对所有具有二次复发灶的患者，依据时间顺序，对比了UTUC原发病灶、初次复发病灶、二次复发病灶的RASSF1A启动子区域甲基化比例，虽表现出了一定的下降趋势，但最终未达到具有统计学意义的连续性的升降变化；最后，为了更好的明确RASSF1A启动子区域甲基化用于预测膀胱肿瘤复发是否可靠，我们注册并建立了前瞻性临床队列，目前已经完成了入组，正在持续随访中。在基础研究方面，我们首先在UTUC细胞系MC-SV-HUC T-2中通过流式细胞技术分选出肿瘤干细胞T2-CSCs，相较于分选前的肿瘤细胞，T2-CSCs中RASSF1A的mRNA和蛋白水平均明显降低；此外，我们还发现T2-CSCs细胞中RASSF1A启动子区域的甲基化水平明显升高；特异性去除RASSF1A启动子区的甲基化能够抑制UTUC细胞的迁移侵袭能力，而敲低RASSF1A基因表达能够促进UTUC细胞的迁移侵袭能力，表明RASSF1A启动子高甲基化抑制了其转录表达，进而维持UTUC细胞干性和促进UTUC迁移侵袭能力。本研究明确了RASSF1A基因启动子区域甲基化同UTUC细胞系迁移侵袭能力之间的关系。待最终的临床研究随访完成后，我们可以得出RASSF1A基因启动子区域甲基化是否可作为良好的肿瘤标志物，用于预测UC患者术后膀胱复发风险的结论，为上尿路尿路上皮癌的精准随访策略制定提供可靠的临床工具。