CD8+CD28-调节性T细胞诱导的再生障碍性贫血病愈机制研究

Acquired aplastic anemia (AA) is an immune-mediated bone marrow (BM) failure attacked by auto-reactive effector T cells. CD8+CD28- regulatory T cells (Tregs) play a regulatory role; it is important for the normal homeostasis of body, and Tregs join in the mechanisms of some diseases, such as tumor, organ transplantation, autoimmune disease and infection of virus. But little was known regarding the function of CD8+CD28-Tregs in AA. The present study will focus on the effects of CD8+CD28-Tregs on AA, including: ① whether AA CD8+CD28-Tregs have a abnormal number; ② whether AA CD8+CD28-Tregs have a abnormal function; ③ the possible role of CD8+CD28-Tregs in the treatment of AA. Thus, our study will provide new insights into immune pathophysiology of AA, and offer new strategies for the treatment of AA.

再生障碍性贫血（AA）是一种自身反应性T淋巴细胞攻击靶器官所致的骨髓衰竭性疾病。CD8+CD28-调节性T细胞（Treg）是发挥抑制作用的效应细胞，参与正常人体稳态的维持，且在肿瘤、器官移植、自身免疫性疾病及病毒感染等病理状态下发挥较为重要的作用。CD8+CD28-Treg在AA病理生理机制中的作用国内外迄今未见报道。本课题拟研究：① AA CD8+CD28-Treg是否存在数量缺陷；② AA CD8+CD28-Treg是否存在功能缺陷；③ CD8+CD28-Treg诱导的AA病愈机制，进一步阐明AA异常免疫病理生理机制，为AA的免疫抑制治疗提供新的干预靶点。

T淋巴细胞介导的造血干/祖细胞免疫损伤是再生障碍性贫血（AA）最主要的发病机制，60-80%患者经强烈免疫抑制治疗（IST）有效为此提供强有力证据。CD8+CD28-Treg作为新型调节性T细胞，可诱导抗原提呈细胞（APC）耐受，并通过分泌细胞因子TGF-和IL10发挥免疫抑制作用。为探讨CD8+CD28-Treg在AA发病机制中的作用，本课题首先检测了重型再生障碍性贫血（SAA）和非重型再生障碍性贫血（NSAA）患者PBMC中CD8+CD28-Treg细胞的数量，发现两组患者CD8+CD28-Treg的数量较健康对照组（HC）均明显减低（分别为7.61 ± 0.99 % vs 16.08 ± 1.21%，P ＜ 0.0001和10.32 ± 1.38% vs 16.08 ± 1.21%，P = 0.043）。其次，SAA组中CD28-IFN-γ+T细胞和CD28- TGF-+T细胞的比例均明显低于HC组。此外，SAA组患者CD8+Treg增殖能力明显低于HC组（21.68 ± 1.91% vs 53.86 ± 4.94%，P = 0.001，n = 4）。本课题亦发现，SAA组患者CD8+CD28-Treg趋化因子受体CCR7的表达水平明显低于HC组（1.54 ± 0.33% vs 4.33 ± 0.39%，P = 0.005，n = 5），且SAA组患者CD8+CD28-Treg体外趋化指数明显低于HC组（0.47 ± 0.22% vs 1.64 ± 0.62%，P = 0.008，n = 3）。共培养显示，SAA组患者CD8+CD28-Treg抑制CD4+T细胞增殖及产生IFN-γ的能力均较HC组明显减弱。SAA组患者CD8+CD28-Treg上调mDC表达ILT 3的能力较HC组显著减弱。体外造血祖细胞培养显示，SAA患者CD4+T淋巴细胞体外培养上清可明显抑制造血克隆形成，且SAA患者CD8+CD28-Treg改善造血克隆形成能力较HC组减弱。综上，本课题证实AA患者体内CD8+CD28-Treg细胞存在内在缺陷，为导致AA免疫异常的机制之一。以CD8+CD28-Treg为基础的细胞免疫疗法有望为AA患者的治疗提供新策略。