牛干扰素-γ诱导牛原代培养肝细胞凋亡通路的研究

肝细胞凋亡在免疫介导的肝炎病因学方面扮演重要的作用。各种细胞因子（肿瘤坏死因子和干扰素-γ等）是介导肝炎的参与者，特别是干扰素-γ尤为重要。在体外，干扰素-γ的单独作用就能引发鼠原代肝细胞发生凋亡。但是，干扰素γ的作用具有严格的种属特异性。所以，牛干扰素-γ是否会引发牛肝细胞发生凋亡？有哪些蛋白因子参与牛干扰素-γ诱导牛肝细胞凋亡过程还不清楚，干扰素-γ诱导牛肝细胞凋亡通路还不确定。因此，本项目拟运用琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等技术，研究牛干扰素-γ诱导牛原代肝细胞凋亡过程；并通过蛋白酶抑制剂拮抗试验等方法验证肝细胞凋亡的具体环节，最终阐明肝细胞凋亡通路，为肝炎病因学研究及肝细胞癌的发生提供理论依据和实验基础。

细胞凋亡是细胞分化及细胞代谢过程当中普遍存在的现象，具有重要的生理意义，但某些病理状态下，细胞凋亡会出现异常。因此，某些情况下，弄清楚细胞凋亡的途径十分必要。本课题通过对H2O2和IFN-γ共同作用HepG2细胞，诱发其产生细胞凋亡，然后通过流式细胞术细胞凋亡情况，通过western blotting和抑制剂的方法检Bad、Caspase-3、Bcl-2、AIF、Caspase-9、细胞色素c和cIAP等这些参与细胞凋亡的蛋白表达情况，最终得出细胞凋亡的通路。实验结果显示该细胞凋亡通路为典型的线粒体参与的通路，为Bad到Bcl-2再到Caspase-3 的过程，而检测的AIF没有参与这个凋亡过程。Caspase-9、细胞色素c（Cyto c ）和cIAP是否参与这个过程还有待于进一步验证。