p66Shc通过抑制PEA3/线粒体转运蛋白信号通路诱导肾小球足细胞凋亡

近年来，FSGS发病率呈上升趋势，足细胞损伤和数目减少与FSGS的发生和进展密切相关。课题组前期发现，线粒体功能障碍（MtD）可导致足细胞损伤，但MtD发生的机制尚不清楚。我们应用基因芯片并结合实时定量PCR发现FSGS大鼠肾皮质中衔接蛋白p66Shc表达显著增加，预实验结果表明p66Shc过表达可抑制转录因子PEA3和线粒体转位蛋白（TSPO）表达，诱导MtD和足细胞凋亡。TSPO基因启动子中含有PEA3结合位点，由此推测：p66shc通过下调PEA3表达，抑制PEA3转录活性，进而阻断TSPO表达，诱导MtD，促进足细胞凋亡。本课题将通过过表达和表达沉默技术，观察p66Shc对PEA3表达及转录活性、TSPO表达、线粒体功能及足细胞凋亡的影响，并分别通过过表达PEA3及TSPO，探讨PEA3/TSPO通路在p66Shc介导MtD中的作用，阐明p66Shc介导MtD和足细胞凋亡的机制。

近年来，FSGS发病率呈上升趋势，足细胞损伤与FSGS发生和进展密切相关。课题组前期发现，线粒体功能障碍MtD可导致足细胞损伤，但MtD发生机制尚不清楚。我们应用基因芯片并结合实时定量PCR发现FSGS大鼠肾皮质中衔接蛋白p66shc表达显著增加，预实验结果表明p66shc过表达可抑制转录因子PEA3和线粒体转位蛋白TSPO表达，诱导MtD和足细胞损伤，且TSPO基因启动子含有PEA3结合位点。本课题则体外加用PAN或ADR刺激剂诱导足细胞损伤和线粒体功能障碍，并通过体外调控p66shc、TSPO、PEA3等表达，通过western-blot、RT-PCR等实验技术，研究发现，PAN 诱导p66shc过表达诱导足细胞损伤和线粒体功能障碍， p66Shc 过表达通过调控PEA3和TSPO表达诱导线粒体功能和肾小球足细胞损伤，p66shc表达抑制则缓解PAN诱导的足细胞损伤和线粒体功能障碍。MPTP抑制剂环孢素A可抑制p66Shc过表达诱导的足细胞损伤和线粒体功能障碍。PEA3可调控TSPO表达，抑制TSPO表达直接诱导线粒体功能障碍和足细胞损伤。PGC-1a过表达可通过调节p66shc表达，从而抑制刺激剂诱导的足细胞损伤和线粒体功能障碍。通过本实验结果，初步揭示PGC-1a/p66shc/PEA3/TSPO轴可能在线粒体功能障碍和足细胞损伤中发挥作用，为FSGS足细胞损伤及线粒体功能障碍机制提供新的视点，并以p66Shc和PGC-1a为靶点对FSGS新药的研制和开发也具有重要的指导意义。