癌细胞分泌exosome改变CTL细胞功能导致鼻咽癌免疫逃逸的机制研究

我们前期研究发现EBV阳性鼻咽癌肿瘤组织中CTL细胞亚群有功能缺陷，但CTL细胞功能缺陷导致肿瘤发生免疫逃逸的调控机理尚不清楚。本项目在相关研究的基础上，提出EBV阳性鼻咽癌细胞分泌的exosome通过EBVmiRNA的表达抑制CTL细胞亚群的功能调控鼻咽癌免疫逃逸的假说。首先通过共培养实验分析鼻咽癌exosome对抗原递呈细胞和CTL细胞免疫功能的影响；再通过qRT-PCR分析EBV阳性鼻咽癌exosome中高水平表达的EBVmiRNA；进一步通过外源性靶miRNA过表达干扰实验，分析相关靶EBVmiRNA通过干扰抗原递呈细胞功能，对CTL细胞的激活和功能的影响。最后建立EBV阳性鼻咽癌的NOD/SCID小鼠模型从体内验证exosome和EBVmiRNA对鼻咽癌免疫逃逸和CTL细胞免疫治疗的影响。本项目的预期结果可发现EBV阳性鼻咽癌CTL细胞功能抑制的调控机理，发现潜在的免疫治疗靶点。

我们前期研究工作发现鼻咽癌肿瘤微环境虽然有大量肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor-infiltrating lymphocytes, TIL），但是目前关于抑制鼻咽癌CTL细胞亚群功能激活并导致肿瘤免疫逃逸发生的相关机制尚不清楚。本项目在相关文献报道的基础上，从体内及体外实验研究鼻咽癌细胞来源的exosome（T-EXO）及其携带的某些蛋白质或miRNA对鼻咽癌肿瘤微环境免疫细胞亚群的数目及功能的调控作用及其相关机制，希望能发现T-EXO在鼻咽癌肿瘤微环境免疫逃逸中的作用，对鼻咽癌患者疾病临床进程进程的影响，并通过机制研究发现潜在的免疫治疗治疗靶点。.重要结果如下：1.我们发现T-EXO可以抑制CD4+和CD8+的T淋巴细胞的增殖，阻断Th1和Th17细胞的分化，诱导Treg细胞的分化，并改变T细胞分泌细胞因子的功能，且可诱导髓源性抑制细胞MDSC的分化。2、我们发现T-EXO富集五个癌细胞来源的miRNA，包括：hsa-miR-24-3p, hsa-miR-891a, hsa-miR-106a-5p, hsa-miR-20a-5p, and hsa-miR-1908。这些miRNA可调控MAPK1信号通过的多个靶基因，并通过改变ERK及STAT蛋白的磷酸化水平影响T细胞的分化及增殖。3、我们进一步验证和发现miR-24-3p在T-EXO介导的T细胞功能失活中有重要的作用。4.机制研究提示exosomal miR-24-3p通过抑制T细胞的FGF11表达，改变ERK和STAT蛋白磷酸化水平，影响T细胞的增殖和分化。5.我们发现缺氧可增加exosomal miR-24-3p的水平。6.T-EXO及exosomal miR-24-3p的血清水平都与鼻咽癌患者的疾病无进展生存有负相关。.结论：本项目的研究结果提示T-EXO在鼻咽癌肿瘤微环境的免疫调控中有重要作用，而且可影响鼻咽癌患者的临床进程。其携带的某些蛋白质或miRNA是鼻咽癌预后的重要标志及潜在的治疗靶点。