鸡尾酒抑癌miRNA表达系统逆转脑胶质瘤恶性表型的实验研究

RNA干涉（RNAi）技术的开发是肿瘤治疗学领域的热点之一，它通过沉默特定肿瘤基因抑制其恶性表型。但是肿瘤发生是一个复杂的过程，通过RNAi阻断单一通路不能从根本上解决问题，加之脱靶效应的副作用，限制了RNAi在肿瘤治疗中的应用。而利用抑癌微小RNA（miR）有可能解决这一问题。已知许多miR具有抑癌分子功能，同一miR靶点众多，且为体内存在的天然分子，不存在脱靶效应的问题。我们设想将多种胶质瘤中低表达且发挥抑癌功能的成熟miR分子串联并导入天然的miR簇中，通过构建这样一个系统在肿瘤细胞中同时表达并加工成熟多种抑癌miR。这样既可以针对同一靶点达到协同沉默效应，又可以针对肿瘤分子网络中的多个靶点发挥沉默效应，突显较单一miR分子更多靶点和更强沉默效应相结合的优势。本研究为现有基因沉默技术在肿瘤治疗中的应用提供了一个崭新的策略，并将伴随更多抑癌miR的发现而拓展其应用前景。

本课题组克隆了6种抑癌miRNA分子的前体片段（miR-26a-1、miR-34a、miR-101-1、miR-124-1、miR-153和miR-451）；分别构建真核表达载体并鉴定成熟形式miRNA的表达水平；构建6种抑癌miRNA分子在miR-17-92簇天然骨架中的表达重组体；鉴定每种miRNA均能从串联体重表达并加工出来。同时发现miR-7通过G1/S期阻滞调控细胞周期进展；并且发现其新的靶基因CCNE1及其在miR-7调节细胞周期进程中的重要意义。乳腺癌的分子亚型分类促进了预后判断的准确性，提高了治疗获益。但是，由于乳腺癌的复杂性，需要研究开发更多的生物学标记和功能学分子。本研究通过分析大样本的乳腺癌患者标本，发现TOP2a只是管腔型（luminal型）乳腺癌患者预后的生物学标志，而不是基底型乳腺癌或HER2阳性乳腺癌患者预后的生物学标志。机制研究显示，miR-139是TOP2a的的上游调节因素。另外，功能获得和功能缺失实验均证实miR139通过靶向调节TOP2a抑制了luminal型乳腺癌细胞的增殖。总的说来，miR-139-TOP2a轴可以部分解释乳腺癌进展的特异性，并能有助于优化乳腺癌的治疗策略。