Sirt1在缺血心肌心脏干细胞增殖中的作用及祛瘀生新法干预机制研究

保护与修复缺血性心脏病中受损的心肌细胞意义重大。已知与细胞寿命相关的去乙酰化酶Sirt1能调控缺血性心脏病心肌细胞保护效应，而自体心脏干细胞能通过增殖归巢参与心肌损伤修复，二者均可延长心肌细胞寿命。前期研究发现活血化瘀类中药对缺血心脏的保护作用可能和这两个方面的病理机制有关，这是不是体现了中医学推陈出新的"祛瘀生新"思想？因此本项目在中医祛瘀生新理论指导下，通过运用Sirt1转基因与基因敲除小鼠缺血性心脏病模型，观察心脏Sirt1与心脏干细胞的活性变化，同时经离体实验对心脏干细胞增殖予以证实，并揭示Sirt1表达对心脏干细胞增殖的影响，阐明Sirt1调控干细胞修复心脏损伤的机制；进一步观察血府逐瘀胶囊对Sirt1-心脏干细胞靶点的影响，以促进血府逐瘀胶囊在干细胞与心脏再生医学中的应用研究，揭示祛瘀生新思想的分子生物学机制，为祛瘀生新思想所指导的证-治-方-药在心脏再生医学中应用提供新思路。

目的 在中医祛瘀生新理论指导下，观察血府逐瘀口服液干预氧糖剥夺（OGD）及SIRT1转染H9c2大鼠心肌细胞模型对Sirt1信号通路相关基因（FOXO家族，NF-kB，P53等）与细胞活性的变化，在分子生物学层面明确“去瘀生新”中药血府逐瘀口服液治疗缺血性心脏病的基因靶点和机制。方法 将H9c2大鼠心肌细胞分为6组：正常组，氧糖剥夺模型组，Sirt1转染模型组，氧糖剥夺+Sirt1转染模型组，氧糖剥夺模型+血府逐瘀口服药给药组，氧糖剥夺+Sirt1转染模型+血府逐瘀口服液给药组。采用CCK-8试剂盒绘制细胞生长曲线，检测乳酸脱氢酶LDH活性，进行Sirt1细胞转染并对分组进行血府逐瘀口服液干预，通过荧光定量PCR、Western-bolt法分别检测Sirt1信号通路相关基因的浓度与蛋白质表达情况，得出结论。结果 RTPCR和Western-blot检测Sirt1在模型组表达明显降低，在用药干预后表达上升；P53、NF-kB、Foxo1、Foxo3、Foxo4在模型组表达升高；Western-bolt测得Sirt1、P53、NF-kB、Foxo1、Foxo3、Foxo4在各组表达具有统计学差异（P＜0.05）。结论 本研究结果证明了Sirt1信号通路在体外氧糖剥夺心肌细胞中的抗凋亡作用，揭示Sirt1信号通路可能是血府逐瘀口服液抗心肌细胞凋亡功能的作用靶点之一，其作用机制为通过调节SIRT1通路影响其下游基因作用表达，从而抑制心肌细胞凋亡，保护缺血心肌。本研究促进了血府逐瘀口服液在心脏再生医学中的应用研究，为其治疗缺血性心脏病提供了较为明确的靶标。