基于未折叠蛋白反应通路研究针刺干预复吸海洛因大鼠脑损伤的分子机制

药物滥用是国内外突出的社会和医学问题。本项目在海洛因复吸大鼠脑神经内质网扩张、核固缩等超微结构改变的基础上，根据未折叠蛋白反应的生物学作用，结合针刺对神经损伤具有修复保护作用的特点，以脑海马、VTA为观察点，以未折叠蛋白反应通路为切入点，提出"调节未折叠蛋白反应是针刺干预海洛因脑损伤的作用机制之一"的假说。建立海洛因复吸大鼠模型，设正常组、对照组、针刺组、美沙酮组，观察针刺百会、大椎穴对海洛因复吸大鼠海马、VTA超微结构的影响，运用"未折叠蛋白应答芯片"探寻针刺干预海洛因脑损伤起效基因，运用分子生物学技术对分子伴侣和折叠蛋白GRP78、CRT，跨膜感受蛋白IRE1、PERK、ATF6、XBP-1等部分关键基因、及泛素和蛋白酶做验证性检测。从细胞、蛋白、基因水平，阐述针刺干预海洛因脑损伤的机制。对引导针灸治疗减少海洛因所致的脑病危害，促进针刺防治成瘾的临床应用，具有重要的现实意义和科学意义

项目的背景：已有大研究表明，海洛因成瘾对脑组织具有慢性损害,其中神经元凋亡是海洛因成瘾致脑神经元损伤的主要形式。那么，复吸海洛因是否可引发脑组织细胞凋亡？观察针刺对未折叠蛋白反应，是否可以阐述针刺干预海洛因脑损伤的可能机制？.结题摘要 .本项目研究发现复吸海洛因导致神经元细胞凋亡增加，针刺百会、大椎具有抑制细胞凋亡的作用，为针刺干预海洛因脑损伤提供了形态学依据。.针刺调控GRP78表达在针刺干预海洛因脑损伤作用机制研究中首次报告。.经未折叠蛋白反应芯片检测发现，复吸海洛因大鼠海马HSP70、HSP105和Vcp下调，而针刺改变HSP70、HSP105和Vcp的下调，通过调控复吸海洛因大鼠未折叠蛋白反应起到抑制细胞凋亡的效应，首次阐释了针刺干预海洛因脑损伤作用与未折叠蛋白反应有关的起效基因。.首次发现报道，针刺通过调控UPR通路，降低Ub、E3、26S的表达，抑制蛋白降解干预海洛因脑损伤的分子机制。.关键数据：Unfolded Protein Response PCR Array检测比较，筛选条件为上调或下调>2.0或<-2.0的差异基因。对照组、针刺组和药物组HSP70、HSP105和Vcp这三个基因上调高于模型组。对这三个基因进行Western Blot验证结果显示，模型组HSP70、HSP105和Vcp蛋白表达明显降低（P＜0.01），与模型组比，针刺组和药物组HSP70、HSP105和Vcp蛋白表达升高，差异明显（P＜0.05）。.科学意义：药物成瘾属慢性复发性脑病，研究如何干预、保护或修复海洛因脑损伤及其作用机制研究，是一个非常重要，具有现实意义的课题。.针刺干预海洛因脑损伤在防治药物成瘾研究领域中具有特色。本项研究立足于中医整体观，阐释针刺通过调控内源性生物活性物质起到干预保护海洛因脑损伤及其作用机制，既为针灸戒毒康复提供了科学依据，丰富了针灸理论，又促进了针灸戒毒康复的临床应用，科学意义和现实意义重大。