Isthmin1过度表达的调控机制及其在脓毒症肺血管渗漏中的作用

The vascular leakage caused by the hyperpermeability of PMVEC is the basic pathophysiological feature of sepsis, and the mechanism is still unknown. We previously found that: a newly discovered vascular leakage inducer-secreted protein Isthmin1 is overexpressed in the lung of septic mice, distributed mainly in type Ⅱ alveolar epithelial cells (ATⅡ). We hypothesized that Isthmin1 over-expressed in the ATⅡ of septic mice participate in the pathological process of septic lung injury by promoting pulmonary vascular leakage. In this study, we aim to (1) investigate the effects hypersecretion of Isthmin1 in ATⅡ on pulmonary vascular permeability; (2) explore the role and molecular mechanisms of C/EBPβ in upregulation of Isthmin1; (3) using cecal ligation and puncture septic mouse model, evaluate the effect of the regulatory pathway in septic pulmonary vascular leakage in mice by interfering C/EBPβ-Isthmin1 signal. This study can deepen the mechanism of pulmonary vascular permeability induced by sepsis and provide new clues for seeking effective drug targets for therapy of sepsis.

肺微血管内皮细胞（PMVEC）通透性增加引起血管渗漏是脓毒症肺损伤的基本病理生理特征，其机理仍不十分明了。我们前期发现，一种新的血管通透性调节因子-分泌型蛋白Isthmin1在脓毒症小鼠肺组织过度表达，主要分布于肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ）。结合文献及相关分析，我们推测：ATⅡ高表达Isthmin1经旁分泌方式作用于PMVEC，促进肺血管渗漏，参与脓毒症肺损伤病理过程。为研究Isthmin1在脓毒症肺血管渗漏中的作用及其过度表达的分子机制，我们拟用体内外实验①明确ATⅡ过度分泌Isthmin1对肺血管通透性的影响；②探究C/EBPβ在Isthmin1过度表达中的作用及分子机制；③复制脓毒症小鼠模型，靶向干预ATⅡ中C/EBPβ/Isthmin1信号，评估该通路在脓毒症肺血管渗漏中的作用。本研究可深化认识脓毒症致肺血管通透性增加的机制，并为寻找脓毒症肺损伤有效药物治疗靶点提供新线索。

肺微血管内皮细胞（PMVEC）通透性增加引起血管渗漏是脓毒症肺损伤的基本病理生理特征，其机理仍不十分明了。我们前期发现，一种新的血管通透性调节因子-分泌型蛋白Isthmin1在脓毒症小鼠肺组织过度表达，主要分布于肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ），但其是否参与脓毒症肺血管渗漏这一病理过程，目前尚不清楚。我们通过细胞共培养的方法明确了ATⅡ高表达Isthmin1经旁分泌方式作用于PMVEC，通过增加其通透性，参与了脓毒症肺血管渗漏的病理过程。在ATⅡ中，核转录因子C/EBPβ可激活Isthmin1表达上调，且该作用始于基因转录水平，我们利用染色质免疫共沉淀（ChIP）、双荧光素酶报告基因试验等技术，详细解析出Isthmin1基因转录起始位点附近的近端调控区域存在2个C/EBPβ结合位点R1和R2，分别位于-1161/-1170和-2970/-2979，明确了Isthmin1是C/EBPβ的靶基因，初步阐明了C/EBPβ在转录水平调控Isthmin1表达的分子机制。本研究可深化认识脓毒症致肺血管通透性增加的机制，并为寻找脓毒症肺损伤有效药物治疗靶点提供新线索。