鹦鹉热嗜衣原体T3SS效应蛋白的筛选与鉴定及功能研究

鹦鹉热嗜衣原体（Cps）是一种严格胞内寄生，多宿主性的人兽共患性疾病，现代医疗仍缺乏有效的防治药物。寻找新的Cps和宿主细胞相互作用的关键效应蛋白，作为设计防治性药物的靶点已成为医学界研究的"热点"课题。现有资料表明Ⅲ型分泌系统（T3SS）效应蛋白是Cps与宿主细胞相互作用的关键。本课题组在Cps基因组部分测序及注释的基础上，以T3SS为切入点，应用生物信息学、比较基因组学预测T3SS效应蛋白编码基因，采用间接免疫荧光技术直接定位、酵母双杂交、异源性T3SS以及T3SS抑制剂等筛选并鉴定Cps T3SS效应蛋白；进一步通过向宿主细胞胞浆中注入中和抗体对其功能进行初步研究；并探讨该内源性蛋白在感染细胞中表达时程及相互作用模式。本项目的开展将进一步揭示衣原体和真核细胞内环境相互作用的分子机制，从而为确定关键蛋白靶向药物防治Cps感染性疾病提供新的思路。

鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydia psittaci，Cps）是一种严格胞内寄生，多宿主性的人兽共患性疾病病原体，现代医疗仍缺乏有效的防治药物。寻找新的Cps和宿主细胞相互作用的关键效应蛋白，作为设计防治性药物的靶点已成为医学界研究的"热点"课题。现有资料表明Ⅲ型分泌系统（T3SS）效应蛋白是Cps与宿主细胞相互作用的关键。本课题组在Cps基因组部分测序及注释的基础上，以T3SS为切入点，应用生物信息学、比较基因组学预测T3SS效应蛋白编码基因，采用间接免疫荧光技术直接定位及T3SS抑制剂等筛选并鉴定Cps T3SS效应蛋白；进一步对其功能进行初步研究；并探讨该内源性蛋白在感染细胞中表达时程及相互作用模式。结果显示：预测了可能的29个CPS效应蛋白编码基因。 CPSIT_0594 、CPSIT_p8等蛋白主要定位于包涵体内，属菌体蛋白范畴；CPSIT_0844、CPSIT_0846 位于包涵体膜。CPSIT_p7为T3SS分泌蛋白，通过JNK/MAPKs和ERK/MAPKs信号传导途径诱导THP-1细胞产生IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α炎症因子。CPSIT_0271 可能是衣原体在感染晚期表达的基因，该蛋白能促进THP-1细胞分泌炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β。CPSIT_0959可能是感染中期表达的基因，该蛋白具有半胱氨酸脱硫酶的活性，可能参与了衣原体内铁硫簇的生物合成。CPSIT_0846、CPSIT_p8蛋白可使免疫小鼠产生特异性免疫应答，对小鼠抗Cps感染具有较好的免疫保护效果，有望应用于诊断试剂盒和疫苗的研发。本项目的开展将进一步揭示衣原体和真核细胞相互作用的分子机制，从而为确定关键蛋白靶向药物防治Cps感染性疾病提供新的思路。