γ-谷氨酰环化转移酶在浆液性卵巢癌生长和侵袭转移中的作用及机制

Serous ovarian carcinoma is the most common subtype of epithelial ovarian cancer which remains the leading cause of death from gynecologic malignancy.The carcinogenesis of serous ovarian carcinoma remains largely unknown.Recently, the viewpoint that malignancy is a kind of molecular disease is generally accepted.We applied proteomic techniques to analyze the protein expression profiles of serous ovarian carcinoma and normal ovarian epithelium tissue aiming to characterize tumor-specific changes in the proteome of serous ovarian cancer.Gamma-glutamylcyclotransferase（GGCT）is one of proteins that exhibited significantly differential expression between normal and cancerous tissues and it may relate to tumor invasion and metastasis.This research was aimed to investigate if GGCT is a new valuable diagnostic biomarkers and /or promising therapeutic targets for serous ovarian cancer.Firsty,the protein alteration of GGCT will be further confirmed in large samples.Then,employing RNAi and gene transfection techinique,we will explore the effects of GGCT upon the biological characteristics of human ovarian cancer cells in vitro and in vivo.The related mechanims also will be investigated.Finally,a yeast twohybrid system will be built to detect the relevant protein interactions to GGCT.

浆液性卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，其生长及侵袭转移机制不明。前期研究发现γ-谷氨酰环化转移酶（GGCT）在浆液性卵巢癌组织中表达异常升高，并与临床分期及预后相关，且GGCT在高侵袭转移潜能浆液性卵巢癌细胞株中表达较低侵袭转移潜能细胞株中明显升高，提示GGCT可能与浆液性卵巢癌的生长和侵袭转移密切相关。本项目拟在此基础上阐明GGCT在其中的作用及机制。首先，扩大样本量，进一步验证GGCT在浆液性卵巢癌组织中的表达；再采用RNA干扰等技术，观察GGCT对卵巢癌细胞生物学行为如增殖凋亡、运动侵袭及血管生成、EMT等的影响；然后建立卵巢癌动物模型，观察基因操作前后细胞成瘤能力及肿瘤播散情况变化；最后利用酵母双杂交技术，找出与GGCT相互作用的蛋白质并验证GGCT作用的信号转导通路。本课题旨在探究GGCT在浆液性卵巢癌生长和侵袭转移中的作用及机制，为阻遏浆液性卵巢癌进展找到新的分子靶点。

浆液性卵巢癌是发病率最高和致死性最强的卵巢恶性肿瘤，多数患者发现时出现广泛播散。前期研究发现γ-谷氨酰环化转移酶（GGCT）在高转移潜能的浆液性卵巢癌细胞中高表达，推测其可能与浆液性卵巢癌的转移有关。本课题组进一步的研究证实了GGCT确实在浆液性卵巢癌侵袭转移过程中发挥重要作用。我们通过免疫组化方法检测了128例高级别浆液性卵巢癌患者中GGCT的表达情况，并与患者的临床病理参数及生存资料进行分析，结果提示GGCT与患者的FIGO临床分期、淋巴转移、腹水量等密切相关，GGCT高表达的浆液性卵巢癌患者的5年总体生存率和无瘤生存率均较GGCT低表达明显下降。进一步的COX回归模型分析提示GGCT是浆液性卵巢癌患者总体生存和无瘤生存的独立预测因子。然后，我们进行了体外细胞试验，首先采用RNA干扰技术沉默了浆液性卵巢癌细胞株（SKOV3, OVCAR3)中GGCT的表达，并筛选出GGCT沉默的稳定细胞株。结果提示GGCT干扰后SKOV3, OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭能力明显下降，细胞调亡没有明显改变，EMT相关分子E-cadherin表达上调, Vimentin和Twist表达下调，VEGF没有明显改变，VEGFR2表达明显上调。然后，我们又采用基因转染技术使浆液性卵巢癌细胞株HO8910中GGCT表达上调，结果发现GGCT过表达后SKOV3, OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭能力均没有明显变化，细胞调亡也没有明显改变，EMT相关分子E-cadherin、Vimentin和Twist表达没有明显差异，VEGF、VEGFR2表达也没有明显改变。随后，我们还进行了体内试验进一步验证。将GGCT沉默后的卵巢癌细胞株SKOV3注射入小鼠腹腔内，建立移植瘤模型，结果发现GGCT沉默后的小鼠肿瘤较对照组生长明显减慢，腹腔内播撒转移也明显减缓。取移植瘤组织进行检测也发现E-cadherin表达上调, Vimentin和Twist表达下调，与体外试验一致。最后，我们还进行了与GGCT可能存在相互/协同作用的蛋白质S100A11的免疫组化及临床研究。总之，上述结果从多角度证实了GGCT促进浆液性卵巢癌侵袭转移。也发现了GGCT很可能没有使肿瘤恶性转化的能力，针对GGCT的靶向治疗很可能可以抑制肿瘤侵袭转移，从而提高患者预后。