基于NLRP3炎症体相关信号通路研究白芍七物颗粒调节溃疡性结肠炎免疫紊乱的机制

Ulcerative colitis (UC) has been recognized as one of refractory diseases by World Health Organization and the prevention and treatment of UC is significant. Immune dysfunction has been demonstrated to be the leading cause of UC pathogenesis. The excessive release of inflammatory mediators is the key process leading to immune dysfunction. The activation of NOD-like receptor protein 3 (NLRP3) inflammasome related signal pathway plays an crucial role in the regulation of the inflammatory mediators. Our recent study found that BAISHAOQIWU granules exhibits considerable curative effects on UC through inhibiting the gene and protein expression of NLRP3 inflammasome and related signal pathways. This project will elucidate the mechanism of BAISHAOQIWU granules in regulating the immune function in UC animal models using a patent prescription. Briefly, the influences of BAISHAOQIWU granules on NLRP3 inflammasome's upstream activation molecules, such as P2X7 receptor, CTSB and ROS, will be investigated in both the NLRP3-knockout and wild-type rats using the immunohistochemical staining, Western blot, and quantitative real-time PCR. This study will provide a new strategy for the pathogenesis study and prevention of UC.

溃疡性结肠炎（UC）已被世界卫生组织列为现代难治病之一，防治本病具有非常重要的意义。免疫调节紊乱已被确定为UC发病的主导因素，而炎症介质的过量释放是导致免疫调节紊乱的关键环节，NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症体相关信号通路对炎症介质又起着重要的调控作用。项目组最新研究发现，白芍七物颗粒能抑制UC大鼠NLRP3炎症体相关信号通路各组分的基因及蛋白表达从而起到治疗UC的作用。在前期研究的基础上，本项目采用专利方白芍七物颗粒，以UC大鼠作为受试对象，运用荧光定量逆转录-聚合酶链反应、蛋白质印迹、酶联免疫吸附测定和鲁米诺化学发光法等多种生物技术手段，通过多阶段实验，逐层深入观察白芍七物颗粒对UC大鼠NLRP3炎症体的上游激活通路P2X7受体、CTSB和ROS的影响以及对NLRP3基因敲除UC大鼠的影响，阐明白芍七物颗粒调节UC免疫紊乱的机制，为UC发病机制与防治思路的研究提供了新的策略。

溃疡性结肠炎（UC）已被世界卫生组织列为现代难治病之一，防治本病具有非常重要的意义。现代医学认为UC发病主要和遗传、环境和免疫因素相关，而免疫调节紊乱已被证实为其主要因素，UC免疫紊乱的机制中NLRP3炎症体起到了举足轻重的作用。而常规药物治疗手段的疗效并却不理想。中医药在治疗UC方面有其独特的优势,如远期疗效好、毒副作用小、价格低廉等特点，然而目前中药制剂在临床应用中并未发挥出优势，其具体机制也尚未完全阐明。因此，研究中药复方制剂治疗UC的作用机理就显得极其重要。.通过建立稳定的UC大鼠模型作为受试对象，运用荧光定量逆转录-聚合酶链反应、蛋白质印迹、酶联免疫吸附测定等多种生物技术手段，测定各组大鼠NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18、P2X7、CTSB及ROS活性氧的表达含量，发现白芍七物颗粒能通过对UC大鼠NLRP3炎症体及其下游炎症因子Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18的表达进行抑制，并摸索出了白芍七物颗粒的最佳实验剂量。而后本研究团队进一步的发现白芍七物颗粒是通过对UC大鼠NLRP3炎症体上游信号通路P2X7受体、组织蛋白酶B（CTSB）和活性氧（ROS）的阻断作用从而达到抑制相关炎症因子的表达。最终通过采用白芍七物颗粒组对 NLRP3 基因缺陷 UC 大鼠的影响也逆向验证了之前的结论。.实验结论：1.白芍七物颗粒可通过抑制炎症因子的表达及释放来缓解炎症反应；2.白芍七物颗粒是通过阻断NLRP3炎症体上游信号通路的方式来抑制炎症因子的表达；.该实验研究论证了中药复方白芍七物颗粒抑制NLRP3炎症体及其信号通路的作用机制，为开发具有自主知识产权的治疗UC的中医药制剂奠定了坚实的理论基础，为临床上治疗UC提供了更多的选择，为其它中药复方的研究提供了一种新的模式。