抗原特异性T细胞量子点标记检测与示踪成像及在RA中的作用机制研究

从瓜氨酸化蛋白、Ⅱ型胶原和人软骨糖蛋白自身抗原中筛选、设计并合成能与其抗原特异性T细胞（AST）结合的抗原肽，包括环瓜氨酸肽（CCP）、CⅡ263-272和HCgp39（265-273），建立类风湿关节炎（RA）AST细胞（含CCP-AST、CⅡ-AST和HCgp39-AST细胞）的多色量子点（QDs）标记分析技术，实现对上述AST细胞的多组分平行测定和功能研究，探讨其在RA早期诊断、病情监测和疾病状态评估中的价值。通过QDs标记示踪结合肽与T细胞相互作用的全过程，了解AST细胞的作用机制，研究上述抗原肽与相关表位变构肽在CD4+T细胞的活化、增殖、无能或凋亡中的作用。建立大鼠胶原滑膜性关节炎（CIA）动物模型，对上述AST细胞进行体内示踪成像和组织细胞学研究，阐明其在CIA大鼠组织中的定位、表型分布和功能变化规律，预期可显著提高对RA的早期诊断水平，并为临床早期干预提供理论和实验依据。

寻找RA的诊断靶标，研究相关抗原特异性T细胞（AST）在类风湿关节炎（RA）早期诊断、病情监测和疾病状态评估中的价值。探索相关抗原肽、自身抗体及其特异性免疫复合物在CD4+T 细胞的活化、增殖、细胞因子分泌与抗体产生中的作用，并阐明AST细胞的作用机制。同时建立胶原滑膜关节炎（CIA）鼠动物模型，对AST细胞进行体内示踪成像和组织细胞学研究，探索其在CIA鼠模型组织中的定位、表型分布和功能变化规律。.建立了量子点（QDs）标记间接免疫荧光（IIF）与流式细胞（FCM）分析技术平台，并成功用于抗核抗体（ANA）和AST细胞（包括CCP/AST、HCgp39/AST、CⅡ短肽AST细胞）的测定研究和表征。基于QDs标记CⅡ短肽/AST细胞的CIA小鼠体内示踪成像，在关节滑膜炎症部位获得了特异性阳性结果信号，为进一步探索该新型标记技术在ANA与AST细研究、RA疾病诊断与发病机制研究奠定了重要的方法学基础。CIA模型鼠体内存在有一系列AST细胞的异常活化、增殖，频数增高，自身抗体产生（包括抗CⅡ、抗PAD酶、抗CCP和抗HCgp39抗体等）及炎性细胞因子（IFN-γ、IL-17、IL-4 与TGF-β等）的表达失衡，且与CIA成模时间、关节炎症指数、血管翳形成及COMP水平变化存在不同程度的相关性。这些免疫病理改变被证实为CIA疾病发展的重要机制。CⅡ优势表位、PAD酶/瓜氨酸化蛋白，与之相关的AST细胞及其自身抗体直接参与了RA/或CIA疾病的发生发展进程。其中CCP/AST细胞在RA患者中呈特异性Th1细胞优势状态，而抗CⅡ短肽和抗PAD酶抗体则与CIA关节炎症指数、血管翳形成及滑膜炎症评分显著相关,这些参数指标均与疾病活动有关。除此之外，包括从RA患者关节滑膜中鉴定的差异表达自身抗原均有可能发展成为潜在的疾病监测和诊断靶标。.通过体外细胞实验与体内示综成像研究，本项目从特异性体液和细胞免疫两个层面，明确了CIA/RA疾病相关自身抗体，3种抗原特异性T细胞增殖与阳性频数，及炎性细胞因子分泌水平的动力学与变化规律。发现其在CIA/或RA疾病发生发展进程中起重要作用，可为临床早期干预提供理论和实验依据，结果有助于对RA发病机制的新认识，并显著提高RA的早期诊断水平。