β-arrestin1 信号通路在原发性肝细胞癌中的功能研究

β-arrestin是G蛋白偶联受体家族的重要调节蛋白，与许多神经疾病，代谢疾病和肿瘤的发生发展密切相关。我们前期研究发现，β-arrestin1在原发性肝癌细胞中的表达及亚细胞定位发生改变；外源表达β-arrestin1可以促进肝癌细胞的增殖及其在裸鼠体内成瘤，而干扰β-arrestin1表达可抑制肿瘤生长。据此我们推测β-arrestin1在原发性肝癌发生、发展中具有一定的作用。本项目拟运用免疫组化的方法检测β-arrestin1在原发性肝癌不同阶段组织中的表达及亚细胞定位，探讨其临床诊断意义；运用肝癌细胞离体增殖试验及裸鼠体内成瘤试验等方法，通过干预β-arrestin1介导的信号转导通路及其与其它信号通路之间的相互作用，研究β-arrestin1如何参与肝癌细胞的生长调节，寻找可以抑制β-arrestin1促进增殖的信号途径，为肝癌预防和治疗提供对策。

由原发性肝细胞癌（HCC）所致的死亡率在恶性肿瘤中排名第三，而我国为世界上肝癌高发国家，每年新发病率约占世界总发病率的一半左右。HCC的治疗，目前仍缺乏有效手段。因此，深入探索肝癌发病机制，寻找有效的药物靶点一直是肝癌研究领域的重点和难点。β-arrestin是G蛋白偶联受体家族的重要调节蛋白，与许多神经疾病，代谢疾病和肿瘤的发生发展密切相关。研究β-arrestin信号通路在肝癌等肿瘤中的作用，有助于阐明肝癌发生机制。我们研究发现，β-arrestin1在原发性肝癌细胞中的表达及亚细胞定位发生改变；外源表达β-arrestin1可以促进肝癌细胞的增殖及其在裸鼠体内成瘤，而干扰β-arrestin1表达可抑制肿瘤生长，揭示β-arrestin1在原发性肝癌发生、发展中具有一定的作用。p53/MdM2通路与肿瘤的发生发展密切相关，而我们研究发现p53/MdM2通路与β-arrestin存在相互作用，MDM2 E3 ligase活性缺失导致β-arrestin与MDM2的相互作用的增强，从而使原本胞浆定位的β-arrestin滞留于细胞核中。导致β-arrestin1和β-arrestin2信号转导功能的异常，包括β-arrestin所介导的β2AR受体在激动剂刺激下内吞明显减少，血管紧张素受体AT1活化后刺激的pERK水平明显减低，揭示MDM2 E3 ligase活性是β-arrestin正常信号转导功能所必需。以上研究内容已经发表在SCI 收录期刊Mol Biol Cell。.为了进一步明确β-arrestin1在人原发性肝癌组织中的表达及亚细胞定位是否具有一定的临床诊断意义，我们试图通过免疫组化染色方检测β-arrestin1在肝癌组织中的分布与细胞内定位。但由于所能获得的β-arrestin1商业化抗体均不适合做原位细胞组织化学染色，我们亦尝试了自行制备及与抗体公司合作制备β-arrestin1单抗，并经western初步筛选到多个杂交瘤克隆可以特异识别内源性蛋白，但相应的免疫染色实验均未见特异性结果，本项目此部分研究内容因为抗体原因未能实现预期目标。.综上所述,我们的研究发现β-arrestin1对原发性肝癌细胞的增殖有促进作用,且β-arrestin与p53/MdM2通路密切相互作用,这些作用可能参与了肝癌的发生与发展，为阐明疾病的发病机制提供了新的思路。