人鼠同源优势表位InsulinA2-10改造肽在人源化Ⅰ型糖尿病小鼠中的保护作用及机制研究

自身反应性CD8+T细胞是致T1D关键因素，应用自身抗原肽或改造肽（APL）诱导自身反应性CD8+T细胞免疫耐受，成为T1D防治研究热点。近来研究显示：insulin是最早启动T1D的关键靶抗原。靶向性诱导insulin特异性CD8+T细胞耐受，可能防止T1D的发生。最近人源化T1D小鼠模型的建立为利用人鼠同源自身抗原肽防治T1D的临床转化基础研究提供了理想模型。前期我们以人鼠同源优势CD8+T细胞表InsulinA2-10为关键靶标，借助分子模拟进行单位点D-型氨基酸替换设计了若干APL，并通过体外功能实验筛选到具有显著拮抗InsulinA2-10特异性CD8+T细胞反应的APL。本课题拟进一步将拮抗性InsulinA2-10 APL应用于人源化T1D小鼠的保护性研究，同时从细胞、分子水平深入探讨其致耐受机制，为基于T1D防治提供新策略和实验依据，也为将来临床转化提供新候选药物。

Ⅰ型糖尿病（T1D）是机体胰岛β细胞破坏而引起糖代谢功能紊乱的一种器官特异性自身免疫性疾病。自身反应性CD8+T细胞是T1D发病不可或缺的直接效应细胞，因此针对β细胞自身反应性CD8+T细胞进行特异性的免疫干预与阻断，重塑机体对β细胞自身抗原的免疫耐受，是一种可能从根本上防止T1D发生或发展的理想策略。.前期研究中，腹腔注射人源化NOD小鼠可溶性mInsA2-10没有T1D保护作用。无论从安全性、稳定性还是有效性而言，改造肽（APL）均要优于天然肽，因此将mInsA2-10进行改造，将可能的TCR位点用D型氨基酸替换得到了6条APLs，体外实验结果表明DC6和DQ4与HLA-A2分子存在结合能力，且显著抑制mInsA2-10刺激的脾淋巴细胞增殖。.进一步在人源化NOD小鼠中，考察给予拮抗性DC6和DQ4是否能防止T1D的发生。将人源化NOD雌鼠分为四组：对照肽、mInsA2-10、DC6和DQ4组，从4周龄腹腔注射各肽，100ug/次，1次/周，连续处理6周，经过35周观察，发现DQ4组具有显著的T1D保护作用，各组的胰岛炎评分结果也表明DQ4组的胰岛炎症最轻。.T1D保护机制研究表明：与无关肽和mInsA2-10组相比，DQ4组的脾CD4+和CD8+T细胞总数显著降低，脾CD4+和CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平显著降低，且脾CD8+T细胞对mInsA2-10特异性的IFN-γ反应也显著下降。提示：在人源化NOD小鼠中腹腔注射DQ4，很好地诱导了自身反应性T细胞的免疫耐受。通过各类Tregs表型分析表明：DQ4组小鼠脾CD8+CD25+T细胞频率显著高于对照肽和mInsA2-10组，且这群CD8+CD25+T细胞高表达Foxp3，而CD4+CD25+Foxp3+T细胞、CD8+CD122+T细胞和CD8+CD28- T细胞亚群的频率在各组间无显著性差异。且DQ4组的CD8+CD25+ T细胞具有比CD4+CD25+T细胞更强的抑制能力。.综上所述，腹腔注射DQ4，可能通过在人源化NOD小鼠体内诱导产生了一群具有免疫抑制功能的CD8+CD25+Tregs，有效抑制了自身反应性T细胞对胰岛β细胞的攻击，从而起到了T1D的保护作用。这将为靶向insulin自身反应性CD8+T细胞特异性免疫干预提供新的实验策略及实验依据，也为将来直接临床转化提供可能的候选药物。