miR-146a调控IRAK-1和TRAF-6基因对脓毒症小鼠肺保护作用的实验研究

抑制肺内巨噬细胞过度激活、降低肺内炎症过度反应是脓毒症时肺保护的根本措施。近年研究和我们的前期工作表明miR-146a与肺泡巨噬细胞炎症反应密切相关，本申请项目拟探索性地将miR-146a转染进体外培养的原代小鼠肺泡巨噬细胞，观察其对Toll样受体信号通路及其下游炎症因子的影响，研究miR-146a调控肺泡巨噬细胞炎症反应的机制。在此基础上，考虑到肺通过呼吸道与外界相通的解剖学特点和聚乙烯亚胺(polyethylenimine, PEI)的肺靶向性特点，创新性地将专门用于体内实验的改进型in vivo-jetPEI介导的miR-146a由气道内滴入小鼠脓毒症肺损伤模型，观察miR-146a在肺内转染效率和调控细胞因子的表达情况，评价其抑制脓毒症肺内炎症反应的效果，探讨其对脓毒症小鼠肺损伤保护作用机制，为脓毒症肺损伤的治疗探索一种新方法。

抑制肺内巨噬细胞过度激活、降低肺内炎症过度反应是脓毒症时肺保护的根本措施。miR-146a 对Toll样受体信号炎症通路具有重要的调控作用。本项目首先通过体外构建肺泡巨噬细胞炎症反应模型，并于体外转染miR-146a mimic上调肺泡巨噬细胞内miR-146a的表达，观察miR-146a对Toll 样受体信号通路及其下游炎症因子的影响，分析它在肺泡巨噬细胞炎症反应中的调控机制；最后于体内构建脓毒症肺损伤模型，并于体内转染miR-146a mimic上调肺组织内miR-146a的表达，观察miR-146a对肺内炎症反应的调控作用，探讨miR-146a对脓毒症肺损伤的保护作用及作用机制。我们按原定计划开展了研究，并取得了预期的研究成果。（1）在LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应模型中，LPS诱导炎症因子表达升高的同时也诱导miR-146a表达的升高，并且rniR-146a与TNF-α mRNA表达的水平呈负相关；通过体外转染miR-146a mimic能明显上调细胞内miR-146a的表达，并且有效下调了miR-146a两个靶基因IRAK-1和TRAF-6的表达；上调miR-146a后抑制了LPS诱导的炎症因子表达，表明在LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应模型中，miR-146a通过沉默TLRs/NF-κB信号通路中两个重要接头蛋白编码基因—IRAK-1和TRAF-6，从而抑制NF-κB的活化，减少炎症因子的表达。（2）将参附注射液（SF）预处理肺泡巨噬细胞后，抑制了LPS诱导细胞炎症因子的表达，并且SF诱导了miR-146a的表达上调，表明在LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应模型中，SF可能通过上调miR-146a的表达抑制炎症反应。（3）体内给予LPS后成功诱导了肺损伤模型，并且上调了肺组织miR-146a的表达；经气管内滴入in vivo-jetPEITM介导的miR-146 mimic，上调了肺内miR-146的表达，并且有效下调了IRAK-1和TRAF-6的表达，上调了肺内miR-146的表达有效抑制了肺内炎症因子的释放，减轻了肺损伤，表明在LPS诱导的脓毒症肺损伤模型中，miR-146a同样通过沉默IRAK-1和TRAF-6的表达，抑制肺内炎症反应，减轻肺损伤。