松辽黑猪肌内脂肪沉积相关基因的筛选与验证

与大多数国外品种相比，松辽黑猪具有肌内脂肪高的优点。为了在猪育种实践更好地利用该特性，采用芯片技术和分子生物学技术对肌内脂肪沉积的机理进行研究。分别选取肌内脂肪低的大白猪和肌内脂肪高的松辽黑猪背最长肌肌肉，采用microRNA芯片技术筛选差异microRNA，利用microRNA靶基因预测软件建立靶基因库，与采用猪基因表达谱芯片筛选获得的差异表达基因库进行比较，获得二库重合的基因，进而采用荧光素酶报告基因系统对重合基因进行验证，获得潜在的目的基因，在猪群体中进行验证。对验证通过的基因利用分子标记技术进行多态性检测和与肌内脂肪水平的相关性分析，以期获得可用于育种生产的多态性位点。

高肌内脂肪对养猪从业者来说意味着高的价格，而且高肌内脂肪与肌肉品质和风味相关。本研究在测定背最长肌肌内脂肪含量的基础上，选取了高肌内脂肪含量和低肌内脂肪含量的松辽黑猪、东北民猪和杜长大白猪，利用表达谱芯片对肌内脂肪沉积相关的基因进行了筛选，利用实时定量PCR和蛋白杂交对候选基因进行了验证。结果表明：（1）三个品种内、黑猪与白猪间肌内脂肪含量均存在显著的差异，黑猪肌内脂肪优于杜长大白猪，尤其是松辽黑猪显著优于杜长大白猪。（2）在高肌内脂肪松辽黑猪与低肌内脂肪杜长大白猪差异基因库、松辽黑猪群体内高肌内脂肪个体与低肌内脂肪个体间差异基因库、高肌内脂肪松辽黑猪与高肌内脂肪杜长大白猪差异基因库中查找共有基因，确定了12个候选基因，利用实时定量PCR对上述基因进行转录验证，发现SFRP4、IGF2、MSTN、CAPN6、CCND2、TGFB3、CA3、POMC、UCP3转录水平与肌内脂肪含量显著相关；选择UCP3（上调基因）、CCND2（下调基因）、SFRP4（下调基因）、POMC（上调基因）进行了翻译水平验证，发现UCP3、SFRP4、POMC蛋白表达量与肌内脂肪含量显著相关。（3）在高肌内脂肪东北民猪与低肌内脂肪杜长大白猪差异基因库、高肌内脂肪东北民猪与高肌内脂肪杜长大白猪差异基因库、东北民猪群体内高肌内脂肪个体与低肌内脂肪个体间差异基因库中查找共有基因，确定了3个候选基因：SOD2（上调基因）、CLDN2（上调基因）、ACOT6（下调基因），利用实时定量PCR进行转录验证，发现它们的转录水平与肌内脂肪含量显著相关；利用蛋白杂交对3个候选基因进行翻译水平验证，发现其蛋白表达量与肌内脂肪含量显著相关。结论：UCP3、SFRP4、POMC的转录与表达水平与松辽黑猪肌内脂肪沉积显著相关，而SOD2、CLDN2、ACOT6的转录与表达水平与东北民猪肌内脂肪沉积显著相关，本研究对深入研究猪肌内脂肪沉积的机制奠定了基础。