胚胎转录因子Oct4基因的表达模式研究及在ES细胞的分离培养中的应用

克隆早期胚特异表达的转录因子牛Oct4基因并构建成两种形式的转基因结构，引入绿色荧光蛋白报告基因（EGFP），通过基因转染及体细胞基因定点打靶技术获得阳性细胞系，再做为体细胞核移植的供体，来制备重构的克隆胚胎，使EGFP在牛囊胚的内细胞团中特异表达，由此来做为确定高质量囊胚的标记，并分离培养胚胎干细胞。通过观察EGFP的表达来克服胚胎干细胞传代培养中难以确定的细胞集落中的细胞数，确定最佳的传代时间。建立转Oct4的转基因动物模型，并分离培养乳腺组织干细胞，便于进一步的应用研究。另外，研究Oct4/EGFP及内源的Oct4基因的表达模式来尝试建立最佳的体外牛胚胎干细胞的培养体系。该课题的实施将有几方面的研究意义：1)由于Oct4基因在胚胎发育分化中起着重要的决定作用，该研究将有助于促进早期胚胎基因表达调控的研究；2）可以应用于体细胞核移植研究，提高克隆动物的生产效率。