解毒凉血方阻抑IL-12家族生成治疗急性肝衰竭的机制研究

One of the key steps for the development of acute liver failure is amplification of inflammatory injury, in which IL-12 acts as an important regulator. Our previous study revealed that Detoxification and Cooling-blood Decoction, a decoction with clinical efficacy in liver failure, enabled to rescue the mice from ConA-induced liver failure with decrease serum IL-12, which implies that the decoction might temper the inflammatory response by reducing IL-12. IL-23 and IL-27, two new IL-12 family members share the similar producing pathway with IL-12 as well synergizing effects with IL-12 in inducing inflammatory injury. Thus, we hypothesized that Detoxification and Cooling-blood Decoction could treat acute liver failure by inhibiting IL-12 family secretion from innate immune cells. To test this hypothesis, we intend: 1) to evaluate the efficacy of the decoction for anti-inflammation in liver damage and identify the major components with ConA-induced acute liver failure model; 2) to explore the target cells of the decoction drugs by using SCID Beige immunodeficient mice along with in vitro experiments; 3) to investigate the mechanism by which interfering with IL-12 family production. Our study would clarify the major components and the immunomodulatory mechanisms of the decoction and shed lights on new therapeutic targets as well as strategies for treatment of acute liver failure.

肝脏炎症损伤的循环放大是急性肝衰竭发生发展的重要原因。IL-12是炎症损伤放大环节的重要调控因子。申请人在总结解毒凉血方治疗肝衰竭临床疗效的基础上，发现该方可降低ConA肝衰竭模型的死亡率及IL-12水平，提示解毒凉血方可能通过降低IL-12减轻炎症反应。鉴于IL-12家族成员IL-23、IL-27与IL-12产生机制相似，又能协同其促进炎症损伤，我们提出"解毒凉血方通过抑制天然免疫细胞分泌IL-12家族细胞因子治疗急性肝衰竭"的假说，本课题组拟：1）在整体水平采用ConA急性肝衰竭模型，通过拆方分析，全面评价解毒凉血方及关键药物减轻肝脏炎症损伤的疗效；2）在细胞学水平采用SCID Beige免疫缺陷鼠，结合体外实验明确药物直接作用的靶细胞；3）在分子水平分析药物干预IL-12家族细胞因子生成的机制，明确解毒凉血方及关键药物的免疫调节机制，为临床中医药治疗急性肝衰竭提供新的治疗靶点和策略。

急性肝衰竭是由病毒、药物、毒物及酒精等多种因素引起的急性大面积肝细胞坏死，肝脏功能发生严重障碍。随着乙肝疫苗接种的普及以及抗病毒药物的应用，重症急性肝损伤的发病率逐年下降。但是由于缺乏阻断急性、大面积肝细胞坏死的有效药物，重症急性肝损伤的死亡率仍居高不下（70-80％），我国每年因此而死亡的人数也高达10-20万。因此，研制靶点明确、有效的抗急性肝坏死药物是治疗急性肝衰竭、降低其高死亡率的关键。.我们在此项研究中采用ConA小鼠肝炎模型，发现解毒凉血方具有明显的抵抗急性肝损伤和抗炎作用。通过拆方分析，筛选到升麻是其中的有效单药，并进一步鉴定到其中的有效单体是酚酸类化合物单体A，三萜皂苷类化合物单体1和单体2。通过体内体外实验分析有效单体的作用机制，发现单体A具有多靶点的抗炎作用。一方面抑制T淋巴细胞分泌IFN-γ；另一方面抑制IFN-γ对巨噬细胞的协同刺激作用，通过影响STAT1和JNK信号通路活化，抑制IL-12的分泌。单体A通过多靶点地抑制适应性免疫细胞——天然免疫细胞之间的循环放大效应，充分发挥抗炎作用。因此，单体A可以多靶点、多环节地抑制Th1型免疫反应，是本项目新发现的免疫抑制剂。单体1和单体2则直接抑制经典途径介导的巨噬细胞活化。.本项目研究通过明确各有效单体的作用机制，充分发掘我国传统中药材的药理和药效。一方面可以联合用药使其发挥最大治疗效应，另一方面可以扩大适应症，本课题不仅为临床中医药治疗急性肝衰竭提供治疗思路，也为升麻和解毒凉血方广泛应用于Th1免疫反应介导的疾病提供理论和实验依据。