微透析－微流控免疫分析芯片在线联用检测脑细胞外液中神经肽研究

神经肽与脑功能和脑疾病之间的关系是目前神经生物学和医学的一个研究热点，脑细胞外液中神经肽的含量与生物机体的正常生理或病理状态密切相关，而脑细胞外液中神经肽的在线分析检测是一个尚未解决的问题。本项目研制组装微透析－微流控非均相免疫芯片在线联用系统，设计并制作具有在线免疫反应功能的微流控芯片；研究优化微透析－微流控免疫分析联用系统的操作条件，建立脑细胞外液中几种神经肽包括神经肽Y、P物质、脑啡肽和缩胆囊肽的实时、在线、高效、灵敏和专一性强的微透析－微流控免疫分析芯片检测方法，并用此联用系统对实验动物下丘脑和脑皮质区神经肽的释放进行动态监测。此项研究为建立以微流控芯片为基础的神经系统疾病的高效快速检测和早期诊断提供基础，对于阐明神经肽含量与脑功能和脑疾病之间的关系、推动神经肽相关的病理和药理研究具有重要的理论价值和临床意义。

神经肽与脑功能和脑疾病之间的关系是目前神经生物学和医学的一个研究热点。缩胆囊素(CCK)和脑啡肽是广泛分布于中枢神经系统的两类神经肽。CCK对摄食、体温调节和记忆等生理功能有重要的调控作用,并且与多种神经和精神性疾病发病紧密相关。脑啡肽参与痛觉信息、免疫活动和精神情绪活动等的调节。脑细胞外液中缩胆囊素和脑啡肽的含量与生物机体的正常生理或病理状态密切相关，研究建立生物体液中缩胆囊素特异性和高灵敏的分析检测方法具有重要的生物医学意义。本项目研制组装微透析－微阵列免疫芯片在线联用系统，研究建立生物体液中脑啡肽和缩胆囊肽的灵敏高和特异性性强的微透析－微芯片免疫检测方法。我们开展并完成的研究工作如下：.1. 开展了实验大白鼠的脑细胞外液神经肽的微透析活体取样研究，我们已能对实验大白鼠脑皮质和下丘脑二个部位分别准确的立体定位和和连续的微透析取样；我们成功制备了实验大鼠抑郁症动物模型，用于获取病变时脑细胞外液中神经肽样品。.2.我们自行组装并搭建了适合生物免疫芯片分析检测的微透析－微流控免疫芯片联用分析系统，该联用系统用于对脑脊液和脑透析液中神经肽进行定量分析的研究探索。.3.建立高效和特异性强的神经肽样品富集方法是实现其生物体液检测的重要前提，我们分别研究制备了缩胆囊素和脑啡肽分子印迹固相微萃取整体柱。我们采用抗原决定簇法，分别合成制备出缩胆囊素和脑啡肽分子印迹整体柱，该分子印迹整体柱作为固相微萃取小柱能从含有高丰度蛋白的人脑脊液样品中选择性的纯化富集低丰度的缩胆囊素和脑啡肽。我们将分子印迹整体柱固相微萃取技术与液质分析仪联用，建立人脑脊液中不同型体的缩胆囊素分离检测的新方法。我们研究建立了分子印迹固相微萃取与HPLC-UV检测法联用定量分析人脑透析液和脑脊液中的脑啡肽的方法，该方法已成功的应用于患有癌症病人脑脊液中甲硫氨酸脑啡肽和亮氨酸脑啡肽的同时测定。.4.我们结合分子印迹与生物芯片两大技术，应用影印石板术，成功研究制备出能特异性识别甲硫氨酸脑啡肽的分子印迹微阵列免疫分析芯片，该芯片兼具印迹物特异性识别，耐酸碱，抗高温和生物芯片高通量，微量消耗的特点。我们以该微阵列芯片建立了高选择性和高灵敏度的脑啡肽的微透析－微阵列芯片在线分析方法。. 此项研究为对于阐明神经肽含量与脑功能和脑疾病之间的关系、推动神经肽相关的病理和药理研究具有显著的理论价值和临床意义。    .