紫云英根瘤菌早期结瘤基因顺序表达时空关系的研究

成功地构建以绿色荧光蛋白基因gfp为报告基因的广宿主稳定启动子探针载体pHN127和pHN1006，用于钓取到费氏中华根瘤菌和华癸中生根瘤菌的组成型与诱导型启动子。发现一个发光强度明显增强的突变gfp基因，经亚克隆和序列分析证实为单个碱基变化产生的K79R突变。用在大肠杆菌表达纯化的表达蛋白进行的光变分析结果表明：K79R的发光强度比GFP高2倍。该基因在GenBank上的注册号为AF183395。用组成型表达的重组子接种紫云英，在微根盒培养的共生条件下用荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜原位跟踪检测并记录了标记根瘤菌在根毛和根表的聚集、侵入线形成与根瘤中发光的含菌细胞等早期结瘤过程。