参附汤对心力衰竭心肌细胞作用的microRNA机制研究

特异性microRNA在心力衰竭心肌转录后调控中具有重要作用。从转录后调控的角度出发，以microRNA为切入点，探讨中药复方及其有效成分治疗心力衰竭的作用靶点和调控机制，无论对于中医药理论创新或中药新药研发都有重要意义。本课组在前期工作基础上，应用microRNA芯片、实时荧光定量PCR等技术，探索参附汤在动物整体水平对心力衰竭大鼠心肌组织microRNA表达的干预作用，在细胞水平研究参附汤有效成分对自由基诱导的损伤心肌中microRNA表达的调节作用，并通过过表达和抑制表达实验从正反两方面验证心肌特异性microRNA的靶基因和细胞功能，结合生物信息分析法，从而阐明参附汤及其有效成分对心力衰竭相关microRNA的作用靶点和调控机制。

特异性microRNA在心力衰竭心肌转录后调控中具有重要作用。本研究从转录后调控的角度出发，以microRNA为切入点，探讨中药复方及其有效成分治疗心力衰竭的作用靶点和调控机制，无论对于中医药理论创新或中药新药研发都有重要意义。.本课题组在前期工作基础上，采用左冠状动脉结扎法建立大鼠心梗后心力衰竭模型，以参附汤灌胃给药方式进行干预。应用多导生理仪及超声诊断仪监测大鼠心脏功能；应用microRNA芯片、realtimePCR、western blot等技术，分别在动物整体水平和细胞水平对心力衰竭大鼠血清及心肌组织/细胞microRNA的表达及参附汤的干预作用进行探索；通过分离提取肝细胞外泌体培养心肌细胞的方式研究循环中microRNA对心肌细胞的影响及参附汤改善心脏功能的microRNA机制；通过构建相关microRNA过表达和敲除载体，进一步探索参附汤及其有效单体治疗心力衰竭的microRNA调控机制及其作用靶点。.结果显示，在动物水平：1.参附汤可显著提高心力衰竭大鼠心脏射血分数、改善大鼠血流动力学指标、降低血清NT-proBNP浓度从而保护心脏功能；2.参附汤可部分逆转心力衰竭大鼠血清及心肌组织中差异表达的microRNA，对这些microRNA进行分析发现，血清中差异microRNA多与心脏功能及心肌损害相关，心肌组织中差异表达的microRNA则涉及心肌肥大、凋亡、纤维化等心力衰竭病理过程。.在细胞水平：1.参附汤可降低缺氧复氧肝细胞外泌体中miR-122含量，从而提高心肌细胞活性，减少细胞凋亡；2.参附汤通过抑制AngII诱导肥大的心肌细胞中miR-27b的上调而抑制心肌细胞的肥大，降低心肌细胞ANP、BNP的表达，从而减轻心肌细胞的损害；3.参附汤有效成分GS-Rb1可显著提高缺血缺氧心肌细胞的存活率，通过抑制缺血缺氧心肌细胞中miR-208的上调从而调控其下游靶基因的表达而起到保护心肌细胞的作用。