利用RNAi阻断植物病毒的昆虫介体传播研究

大部分植物病毒都依赖其生物介体实现水平传播，在长期的进化过程中，植物病毒与其介体形成了特异性的互作关系。因此，通过阻断病毒生物介体传播是防治植物病毒病害的重要策略。.研究表明：昆虫取食表达dsRNA的植物后，可特异性诱导其体内靶基因的沉默。本研究拟通过构建能表达PVY传毒介体-豌豆蚜传毒基因dsRNA的转基因烟草，豌豆蚜取食后，诱导其体内的RNA沉默而影响传毒相关蛋白的表达，切断病毒通过其生物介体的传播，最终阻止病毒的流行和传播。.本研究也将利用该体系进一步鉴定其它3个可能的昆虫传毒蛋白，验证豌豆蚜传播PVY的"桥梁"假说，解析病毒与其介体之间复杂的互作关系。.本研究结果将丰富植物病毒与介体的互作理论，提出通过阻断病毒介体传毒而防治植物病毒病害的新方法，对RNA沉默在植物病害防治上应用具有理论意义和指导意义。

本研究分别以桃蚜RPS2蛋白和EF1α蛋白基因500bp左右的片段为模板，通过引物设计和PCR方法获得dsRNA合成模板并利用试剂盒进行dsRNA的体外合成。通过人工饲料对桃蚜进行饲喂，使桃蚜获取dsRNA,检测桃蚜RPS2蛋白和EF1α蛋白基因表达情况以及带毒情况，并进行烟草的传毒实验。qPCR检测分析表明，取食含有dsRNA人工饲料的桃蚜，其靶标基因EF1α表达量均有显著下调，同时其PVY病毒的携带量也有所下降。本研究证明，通过干扰病毒与介体的传毒蛋白表达是一种有效防治植物病毒病害的方法。