山羊朊蛋白基因（PRNP）转录调控因子的筛选与鉴定

The goat scrapie is caused by the conformation coversion of cellar prion protein PrPc(α-helical form) to pathogenic PrPsc(β-sheet-rich isoform).The expression level of PrPc gene (PRNP) is crucial condition for the initiation,progression,transmission of scrapie in goat.It is not been done enough in-depth research on the transcriptional regulation in goat PrPc expression .The project is to analyze regulation sequences in UTR region of caprine PRNP gene using bioinfomatics and comapative genomics; to screen key transcriptional factor on cellular level using luciferase report gene system and green fluorescent protein report gene system; to identify the role of the candidate transcription factor in caprine PRNP gene expression using over-expression and deletion mutation method.?The results will provide important theoretical basis to prevent the occurrence of scrapie in goat.

山羊痒病是由以α螺旋为主的细胞型朊蛋白PrPc转变为富含β折叠的致病型朊蛋白PrPsc引起的。PrPc基因(PRNP)的表达水平是痒病起始、发展和传染的必要条件。关于山羊PrPc表达的转录调控研究尚不够深入。本项目利用生物信息学和比较基因组学对山羊PRNP基因的非翻译区调控序列进行分析；结合荧光素酶报告基因系统和绿色荧光蛋白报告基因系统，在细胞层面筛选调控山羊PRNP基因表达的关键转录因子；利用候选转录因子过表达和缺失突变技术，鉴定候选转录因子在调控山羊PRNP基因表达中的作用。结果将为防控山羊痒病的发生提供重要的理论依据。

山羊痒病是由以α螺旋为主的细胞型朊蛋白转变为富含β折叠的致病型朊蛋白引起的，朊蛋白基因（PRNP）的表达水平是痒病起始、发展和传染的必要条件。本项目结合生物信息学和比较基因组学对山羊PRNP基因的非编码区序列进行了分析，并结合报告基因系统筛选调控其表达的关键转录因子。利用双荧光素酶报告系统确定了山羊PRNP基因核心启动子区域定位在包含外显子1在内的601bp区域；利用双荧光素酶和绿色荧光蛋白报告基因系统确定了核心启动子区域内的4个保守motif影响基因的启动子活性；过表达转录因子Sp1重组质粒与具有启动子活性的片段共转染，结果发现过表达Sp1增强了启动子活性。利用缺失突变技术构建了一系列不同长度的重组质粒，双荧光素酶报告系统结果表明在内含子1区域未发现具有启动子活性的区域，但存在抑制基因转录的转录因子结合位点。通过本项目研究，确定了山羊PRNP基因表达的关键调控区域，结果将为降低该基因的表达和防控山羊痒病的发生提供重要的理论依据。