靶基因siRNA的量子点组装和原位检测新方法与基因功能研究

由siRNA诱导的RNA干扰技术是当今基因功能研究的有力工具，但将siRNA高效特异地转入体内并进行灵敏示踪仍是抑制该技术发展和广泛应用的瓶颈。构建良好载体、设计RNA干扰体系、建立原位检测方法已成为生物体内RNA干扰研究领域的热点课题。本项目结合化学、生物、材料、临床医学等领域的新成就，采用纳米与组装技术，制备生物相容性壳聚糖衍生物和新型siRNA纳米载体，设计siRNA干扰序列，组装siRNA-量子点复合物，建立灵敏的siRNA原位示踪与检测新方法；并发展新型RNAi体系，选择4种功能基因，研究生物体或细胞内的RNAi机制，阐明乳腺癌、食管癌患者组织和外周血中部分功能基因的表达水平及临床意义，建立新的肿瘤分子标志物检测谱，为高通量基因功能研究、基因表达调控与阐明肿瘤致病机制提供新途径，为特异性的临床肿瘤诊断提供新方法，对于生命分析化学、临床医学和生命科学领域的发展具有积极意义。

在国家自然科学基金（No. 21075055）的资助下，项目组于2011年-2013年开展靶基因siRNA、microRNA、mRNA检测新方法及其功能研究，取得了预期研究成果，在Angew. Chem. Int. Ed., Anal. Chem., Biomaterials, Biosens. Bioelectron., Cancer Sci., Cancer Biother. Radio.等刊物发表论文27篇（SCI刊物24篇，IF>5.0刊物12篇），其中以主持人为通讯（或共同通讯）作者的论文24篇，申请国家发明专利2件，获授权专利1件。建立了细胞内microRNA的原位检测与DNA可视化分析方法；提出了siRNA下调UHRF1及其对卵巢癌细胞生长的抑制作用，揭示了癌与癌旁组织iASPP mRNA、外周血HLA-A mRNA、hUHRF1基因、CDKL1基因、MACC1、OPN-C等作为肿瘤辅助诊断标志物的可能性；总结了量子点组装及其生物医学应用进展，并在此基础上发展了多种用于标志物检测的免疫分析新方法；研制了量子点杂交探针，并用壳聚糖（CS）/聚谷氨酸（PGA）复合物为基因载体，建立了细胞内pre-miRNA的检测方法。项目执行期间，主持人被评为江苏省“333工程”第二层次科技领军人才、江苏省优秀医学人才、“科教兴卫工程”江苏省医学领军人才，获教育部自然科学一等奖（排名第3），应邀在美国Biomarkers国际研讨会作邀请报告，并赴英国UCL医学院开展合作访问研究，培养硕士研究生2名，协助培养博士研究生3名。