3D粘附下DISH黄韧带骨化细胞的成骨相关性miRNA分析

由于成骨细胞分离困难，细胞与基质的粘附方式改变其生物学行为，尚未发现人类成骨指令性miRNAs。我们前期研究以samd4和wnt3amRNA共表达于人类MSCs，使其高表达miR122a,miR638。为了进一步明确和寻找人类成骨miRNAs, 利用整块切除的弥漫性特发性肥大性骨病（DISH）患者的骨化黄韧带，获得高纯度的具有成骨功效的软骨细胞。在模拟体内的3D粘附条件下增殖培养，减少 miRNAs的信息损耗。在此基础上，提取miRNAs,以microarray 筛查，与miRBase比对，以PicTar软件预测靶mRNA及成骨相关性。Liquichip定量检测，确定阳性miRNAs。而后，制作阳性miRNAs探针，原位杂交。并通过构建表达，评价其成骨功效。力图发现成骨相关miRNAs及DISH相关miRNAs,并为广义的人类功能特意性miRNAs研究提供新思路，论证3D粘附培养优势。