实验性关节炎G蛋白偶联受体脱敏与MAPKs信号转导通路调节及栀子苷干预研究

类风湿关节炎(RA)是由炎性细胞因子介导的慢性、系统性、自身免疫性疾病。β2肾上腺素受体(β2AR)是免疫应答中重要的G蛋白偶联受体，其脱敏机制受两类蛋白(GRKs,β-arrestins)调控，并沿下游MAPKs信号转导通路发挥作用。本项目拟建立大鼠佐剂性关节炎(AA)模型，采用整体给药和体外细胞培养实验手段，应用蛋白免疫印迹、免疫组化和放射免疫法等技术，以AA发病的免疫细胞-外周血T淋巴细胞为突破口，以受体脱敏机制为切入点，以MAPKs通路关键信号分子为目标，探讨清热解毒中药栀子抗炎镇痛有效成分-栀子苷对IL-17、IL-1β和TNF-α诱导的AA大鼠外周血T淋巴细胞β2AR脱敏和下游MAPKs信号转导通路的分子作用机制及作用靶点，及其调节该免疫细胞分泌和增殖功能的作用特点，为进一步阐明中医药学"RA从毒辩治"理论的科学内涵、揭示RA新的病理机制和治疗药物作用靶点提供更多的实验依据。

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是由炎性细胞因子介导的慢性、系统性、自身免疫性疾病。β2肾上腺素受体(β2 adrenergic receptor, β2AR)是免疫应答中重要的G蛋白偶联受体，其脱敏机制受两类蛋白(GRKs, β-arrestins)调控，并沿下游MAPKs信号转导通路发挥作用。建立大鼠实验性关节炎的2种模型，即佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)和胶原性关节炎（colleagen-induced arthritis, CIA）模型，以清热解毒中药栀子抗炎镇痛有效成分—栀子苷(geniposide, GE)为研究对象，采用GE治疗给药和体外细胞培养实验手段，应用蛋白免疫印迹、ELISA、流式细胞术和放射免疫法等技术，以AA发病的免疫细胞—外周血T淋巴细胞为突破口，又增加以RA病变的靶细胞—滑膜成纤维细胞和CIA大鼠外周免疫细胞—肠系膜淋巴细胞为抓手，以受体β2AR脱敏机制为切入点，以MAPKs通路中JNK、ERK和p38信号转导中的关键蛋白分子为目标，探讨GE对AA大鼠外周血T淋巴细胞、滑膜成纤维细胞β2AR脱敏和MAPKs信号转导通路的分子作用机制及作用靶点，及其调节免疫细胞和靶细胞分泌和增殖功能的作用特点，为进一步阐明中医药学"RA从毒辩治"理论的科学内涵、揭示RA新的病理机制和治疗药物作用靶点提供更多的实验依据。    .考察了GE对AA大鼠外周血T淋巴细胞(PBL)分泌IL-1、TNF-α、IL-10(Th2)、IL-23和TGF-β等细胞因子水平、增殖水平以及cAMP水平的的影响。GE治疗给药 (ig, d 17~d 24) 可明显抑制AA大鼠关节肿胀，下调过高的增殖水平，下调炎性细胞因子TNF-α和IL-23水平，上调抗炎细胞因子IL-10和TGF-β1水平。栀子苷恢复炎性细胞因子和抗炎细胞因子（Th1/Th2/Th3）的平衡，可能是其发挥治疗RA作用的机制之一。.探讨了栀子苷对AA大鼠外周血T淋巴细胞β2-AR 脱敏机制的影响。促进β2AR脱敏，恢复AA大鼠外周血T淋巴细胞的β2AR-G蛋白-cAMP信号正常转导可能是GE发挥作用的重要机制之一。.探讨了GE对MAPKs信号通路的影响，抑制MAPKS信号通路中JNK、ERK和p38的过度磷酸化，是GE发挥治疗作用的机制之一。