肝X受体的选择性调控对脑内Aβ的影响及其机制研究

β淀粉样蛋白(Aβ)沉积是阿尔茨海默病(AD)的关键病理表现，因此Aβ是研究AD发生发展机制和治疗药物开发的重要突破口，近些年研究发现肝X受体（LXR）的激活可通过影响体内胆固醇代谢使脑内Aβ生成减少，故LXR激活剂具有开发成为AD治疗药物的前景。本课题拟研究LXR两种不同亚型（LXRα和LXRβ）的选择性调控对脑内Aβ蛋白沉积的影响及其机制，通过基因沉默技术及使用人工合成激动剂分别实现LXRα和LXRβ的体外特异性抑制与激活，采用实时定量PCR、ELISA、Western-blot等方法确定相应受体亚型对Aβ蛋白水平及相关代谢基因表达的影响，阐明LXRα和LXRβ在Aβ沉积中的特异性功能，明确参与降低脑内Aβ沉积的LXR亚型并探讨有关机制，为开发特异性AD治疗药物和深入研究其药理作用机制提供有力的证据。

本项目主要进行肝X受体(LXR)两个亚型LXRa和LXRb的特异性调控研究。我们设计了多个小干扰RNA在人神经母细胞瘤细胞系里分别进行LXR两个亚型的沉默，结果成功实现了LXRa亚型的特异性抑制，获得了具有较高抑制效率和特异性的siRNA序列，为LXRa的特异性沉默研究提供了可靠的工具。在对LXRb进行RNA干扰实验的过程中，发现转录抑制与翻译抑制趋势相反的情况，进一步的研究发现该siRNA的靶序列设计在LXRb编码基因NR1H2 的3’-UTR，生物信息学分析结果表明该序列中存在miRNA结合位点，双荧光素酶报告基因实验证实miR-18a对LXRb存在明确的调控作用。.此外，我们进行了LXR对血管平滑肌细胞(VSMC)功能的影响研究，主要研究 VSMC中血管紧张素II(Ang-II)对LXR的调控，初步结果证明Ang-II能够显著下调VSMC细胞中LXR的表达水平，后续我们将进一步对调控的机制与体内效应进行深入研究。