土家族药胡颓子叶治疗齁病的组分-效应关系及机制研究

The leaves of Elaeagnus pungens Thunb., a medicine from Tujia Nationality, are very effective in treating the asthma and bronchitis. On the basis of our previous research on the resources, chemical components and some pharmacological activities, this project intends to advance the study on the chemical components-biological activities relationship and mechanism of E.pungens leaves on the asthma and bronchitis. Modern separation, purification and identification techniques, together with HPLC/DAD/ELSD and HPLC/MS/MS, will be employed to obtain the chemical components group including flavonoids, alkaloids and terpenes and analyze the quantity of some effective compounds. Then, the evaluation of the anti-asthmatic and anti-inflammatory activities will be carried on in the ovalbumin-induced asthmatic animals. And the mechanisms of the actions will be investigated in the lung slices and primary-cultured bronchial smooth muscle cells. Finally, the effective chemical components will be clarified and the importance of each effective substance, as well as the multi-targeting and synergistic effects, will be elucidated from the perspectives of their effectiveness and mechanisms. This project expects to clarify the effective components and their pharmacodynamic actions of E. pungens leaves, to provide the surport for treating the asthma and bronchitis and promote the clinical features in Tujia Nationality medicine.

土家族药物胡颓子叶具有敛肺止齁（支气管哮喘、喘息性支气管炎）的良效。在前期资源、化学成分、部分药理活性研究基础上，本项目拟进一步开展胡颓子叶治疗齁病的化学物质组分-生物活性效应（组分-效应）关系及机制研究。经多种分离纯化手段，结合HPLC/DAD/ELSD和HPLC/MS/MS等技术，富集胡颓子叶黄酮、生物碱和萜类化学组分群，鉴定化学成分并测定含量，获得胡颓子叶的化学物质组分信息；在卵蛋白激发小鼠哮喘模型等整体动物水平，进行其平喘、抗炎活性的评价，采用原代支气管平滑肌细胞，开展其作用机理研究；结合化学物质信息，从药效和作用机理方面弄清有效化学组分群或有效化学成分所发挥的有主次、多靶点、有机整体协同的作用关系，阐明胡颓子叶治疗齁病的物质成分、药效产生的物质作用过程和具体机制，为其临床治疗齁病提供有力的科学依据，从而促进土家族医药治疗疾病特色优势的发挥。

胡颓子叶（Elaeagnus pungens）是一味传统应用的平喘良药，本项目开展了其黄酮等成分群的化学、活性及质量研究。建立了UV-Vis法测定胡颓子叶总黄酮的含量方法，其简便可靠，重复性和准确度均符合方法学要求，已经增补进入 “湖北省中药材质量标准（2017年版）”， 填补了胡颓子叶药材质量标准中的含量测定空白，为其药材质量保证提供了应用价值。此外，建立了酸水解-HPLC法测定胡颓子叶中3种黄酮苷元的含量，在测定同属不同种胡颓子叶总黄酮苷元含量时，灵敏度较UV-Vis法更高，表明可用于评价同属植物的黄酮质量。采用正交实验法优化了胡颓子叶黄酮类成分的提取工艺，在优化条件下（料液比1：30，乙醇浓度70 %，提取次数3 次），胡颓子叶总黄酮苷元得率为0.243 %。联合应用聚酰胺及HP-20、ODS填料，柱层析法分离纯化胡颓子叶总黄酮，其纯度达到95%以上。通过LC-MS和前期黄酮化合物结构图谱及文献，确定该纯化物的各组分化学成分结构信息。开展了胡颓子叶E. pungens、披针叶胡颓子叶E. lanceolata、宜昌胡颓子叶E. henryi三种药用植物的显微鉴定、红外光谱法、HPLC指纹图谱鉴别和质量分析研究，明确了其鉴定、品质评价与质量控制方法，并评价其水提取物的止咳、平喘、祛痰活性作用，佐证三者在鄂西土家族地区等同用于止咳、平喘有其合理性，为胡颓子属三种药用植物叶的临床应用提供了重要的实验依据。采用小鼠离体气管平滑肌实验，胡颓子叶黄酮（0.0316-10.0 mg/mL）能够舒张高钾引起的小鼠气管平滑肌收缩，并且舒张作用呈现浓度依赖性，其作用IC50为0.46 mg/mL。采用膜片钳技术，在细胞水平离子通道研究发现，胡颓子叶黄酮能够阻断电压依赖性L型钙通道电流，其舒张小鼠气管平滑肌作用与阻断L型钙通道有关。通过行为学评分及炎性因子、病理指标评价，成功造模小鼠OVA 诱导过敏性哮喘模型，灌胃给予胡颓子叶总黄酮后能减轻肺组织的病理病变，对 OVA 诱导的炎症免疫调控有积极影响；采用RAW124.7细胞，通过NO、IL-6等检测，初步表明胡颓子叶黄酮具有抗炎活性。这些研究结果为阐释胡颓子叶平喘药效物质基础、资源品质评价及进一步推广应用提供了重要的依据，为推动传统药物的现代化科学研究并发挥其更广泛的治疗疾病作用做出了基础工作。