栀子苷通过GATA1/ADRB2信号轴促巨核细胞分化在蒙药齐顺保利尔治疗ITP中的机理研究

ITP is an immune cause of thrombocytopenia, and serious could endanger life. Current clinical treatment or recurrence rate is high or expensive. Mongolian Qi Shun Bao Li Er had achieved a good effect in clinical treatment of ITP, but the effective component is unclear and the mechanism is unknown. The results showed that the main component of geniposide could promote the differentiation of megakaryocyte , at the same time could increase ADRB2. Analysis of the literature found that ADRB2 is associated with myelodysplasia and the ITP related transcription factor GATA1 with binding sites on the ADRB2 promoter. But ADRB2 in ITP is not reported. On the basis of hypothesized, geniposide is involved in the Qi Shun Bao Li Er of Mongolian medicine in the treatment of ITP by the GATA1/ADRB2 signaling axis in promoting megakaryocytic differentiation. In order to verify this hypothesis: using the human umbilical cord blood CD34 induced megakaryocytic model, ITP animal model validate gardenoside with functions of promoting the megakaryocyte differentiation and raising GATA1, ADRB2; The luciferase and ChIP experiment validation GATA1 can direct regulate ADRB2; Reverse function experiment confirm that the molecular mechanisms of gardenoside inducing megakaryocyte differentiation is through GATA1 / ADRB2 signal axis. The implementation of this project for Mongolian Qi Shun Bao Li Er , provide a scientific basis for clinical promotion for the treatment of ITP.

ITP是免疫原因导致的血小板减少症，严重者可危及生命。目前临床治疗方法或复发率高或昂贵。蒙药齐顺保利尔在临床治疗ITP上取得了很好的效果，但有效成分不清机理不明。预实验显示其主要成分栀子苷可促进巨核细胞分化，同时可上调ADRB2。分析文献发现，ADRB2与脊髓发育不良相关；ITP相关转录因子GATA1在ADRB2启动子上具有结合位点。但ADRB2在ITP未见报道。据此提出假设，栀子苷通过GATA1/ADRB2信号轴促进巨核细胞分化参与到蒙药齐顺保利尔治疗ITP中。为验证该假设：采用人脐血CD34诱导巨核细胞模型、ITP动物模型验证栀子苷具有促巨核细胞分化功能及上调GATA1、ADRB2；采用荧光素酶及ChIP实验验证GATA1可直接调控ADRB2；功能回复实验验证栀子苷诱导巨核细胞分化的分子机制为通过GATA1/ADRB2信号轴。本项目的实施为齐顺保利尔治疗ITP的临床推广提供科学依据。

原发性免疫性血小板减少性症（Idiopathic thrombocytopenic purpura, ITP）是一种自身免疫性疾病，以血小板严重减少和皮肤黏膜出血为特征。目前 ITP 的发病机制还未完全阐明。ITP主要的临床表现为皮肤黏膜瘀点、瘀斑、严重者可因颅内出血而危及生命，约占出血性疾病总数的30%。本研究按照课题设计与目标进行研究内容，完成蒙药“齐顺保利尔”治疗ITP的体内外试验，利用血清药理分析筛选出蒙药“齐顺保利尔”入血活性成分15个小分子。建立ITP小鼠模型，利用蛋白组学和转录组学分析发现差异表达基因SERPINE1，ECM1，PGK1，MIF，GPT，SNCA。而且利用贝尔斯坦数据库；Therapeutic Targets Database；Protein Data Bank；US National Library of Medicine(PubMed)进行网络药理学分析发现自身免疫性疾病相关差异小分子Silibinin和Aucubin。通过查阅大量文献发现，活性成分Silibinin，又称水飞蓟宾或黄素，属于黄酮类有机化合物。水飞蓟宾是一种极弱的碱性化合物。在蒙药齐顺保利尔的多种成分中均含水飞蓟宾的成分，但未进行定量。目前水飞蓟宾正在很多传统医药团队研究，以确定其是否可能在癌症治疗中发挥作用（例如，由于其抑制STAT3信号）。活性成分Aucubin（AU）是一种环烯醚萜苷，来源于杜仲，已被报道通过抑制小鼠巨噬细胞中TNF-α的产生而显示出抗炎活性。桃叶珊瑚甙对TNF-α诱导分化的巨噬细胞中脂肪因子致动脉粥样硬化变化的影响。然后我们采用Discovery Studio（2.5.5 version）软件进行差异表达基因（SERPINE1，ECM1，PGK1，MIF，GPT，SNCA）和差异表达入学小分子（Silibinin和Aucubin）靶向分析发现，MIF基因和Silibinin，Aucubin有共同的靶向性关系。不过，目前还未清楚代谢物Silibinin和Aucubin和靶点蛋白MIF之间不仅存在单纯的线性关系，有着网络性的诸多关系。我们利用体内、体外试验验证Silibinin和Aucubin的代谢通路与ITP的发生发展相关的免疫调控通路MIF/CD74和糖皮质激素代谢通路之间有着负调控关系。初步探索了蒙药齐顺保利尔治疗ITP药物机理。