miRNA在蒙药齐顺保利尔治疗ITP中的调控和分子机制

Immune thrombocytopenia (ITP), also known as idiopathic thrombocytopenic purpura, is an autoimmune disease characterized by low platelet count and increased bleeding tendency, which can lead to severe intracranial hemorrhage and life-threatening. Currently, glucocorticoid and splenectomy are still the main methods for the treatment of ITP, with the efficiency of about 70%. However, treatment with glucocorticoid tends to relapse after cure and on the other hand splenectomy increases the risk of surgery due to the complication of internal bleeding. Clinical analysis following ITP therapy with Mongolian medicine Qi Shun Bao Li Er showed that this treatment can significantly increase platelet count at high efficiency with a worth noting low recurrence rate. Moreover, compared to other treatments, Mongolian medicine Qi Shun Bao Li Er has low side effect and it is safer and more reliable for long term clinical medication. This work will profile miRNA expression in the blood sample of ITP patients to understand the role of miRNAs on the pathogenesis of ITP. Furthermore, we will study the differentially expressed miRNAs and their target genes in ITP samples before and after treatment with Mongolian medicine Qi Shun Bao Li Er, which will hopefully provide the molecular mechanism for the application of Mongolian medicine Qi Shun Bao Li Er on clinical diagnosis and treatment.

免疫性血小板减少性紫癜（immune thrombocytopenia, ITP)是由于机体免疫系统功能紊乱引起血小板过多破坏导致其数目减少的出血性疾病，严重者可因颅内出血而危及生命。目前，糖皮质激素和切脾仍然为ITP治疗的最主要手段，有效率约为70%，但糖皮质激素为主的治疗停药容易复发，而切脾由于术中易出血导致手术风险增大。从前期以蒙药齐顺保利尔治疗为主的临床资料分析中发现，该药具有明显的提升血小板作用，其有效率高，特别值得关注的是复发率低。而且蒙药齐顺保利尔的毒副作用低，临床长期用药安全可靠相比其他治疗方案更具优势。本工作将通过研究ITP患者血液中的miRNA表达谱来揭示miRNA基因调控途径在ITP发病过程中的作用，同时通过研究蒙药齐顺保利尔在ITP治疗过程中miRNA的差异表达及其靶标基因来从分子水平上为蒙药治疗ITP机理提供科学的依据，完善评价蒙药齐顺保利尔的疗效，指导临床诊疗。

蒙药齐顺保利尔在临床治疗效果明显，但其尚未清楚治疗机制，这在一定程度上阻碍了该药推广到其它地区用于治疗ITP以及其它出血性疾病上。本工作通过以下方面开展，在分子水平上为蒙药治疗ITP机理提供科学的依据，评价蒙药齐顺保利尔的疗效，指导临床诊疗。方法：1.临床疗效评价：以蒙药齐顺保利尔为主剂辨证施治时辰给药，按蒙医整体观的理论，口服蒙药。结果显示各试验组中蒙药治疗后疗效显著改善，治疗后血小板计数显著提高，无出血等现象，治疗前后血小板计数有显著差异（P＜0.05）。而治疗后与健康人比较血小板，血小板计数无显著差异，证明蒙药齐顺保利尔治疗ITP有显著疗效，趋于健康人。2.血浆miRNA扩大样本验证：结果发现可能与ITP的发病机制相关的25个异常表达的miRNA。研究团队通过生物信息分析找出于ITP血小板生成最接近的hsa-miR-539-5P和hsa-miR-143-3P来进行RT-PCR验证，结果证明蒙药治疗后ITP患者表达趋于正常水平。同时进行基因功能分析，发现凡是治疗相关的差异表达的miRNA的基因功能条目比健康对照组及ITP患者组的基因条目数量较多，这能证明经过蒙药齐顺保利尔治疗的ITP患者的基因调控功能更为显著。而这些基因均与血小板激活、免疫调节功能等相关。3.蛋白质表达水平研究结果中筛选了ITP-MIF，PGK1和IGHM中三个重要的上调表达蛋白，通过RT-PCR验证结果。在此基础上，蛋白质数据分析鉴定出肌球蛋白反应性免疫球蛋白重链可变区MRIgHV和IGHGγ3-like两种蛋白质在对照组、ITP病人组和有效治疗后组差异显著。对该两个蛋白进行基因本体富集分析，表明这两种蛋白主要参与内肽酶活性，免疫效应过程，免疫应答，补体激活，蛋白激活级联和报告基因介导的内吞作用，这一结果证实这两种蛋白质与免疫反应高度相关，使其成为ITP疗效评价的相关标志物。结果：初步阐明miRNA介导蒙药齐顺保利尔治疗ITP相关的基因调控路径，从而填补了传统蒙药齐顺保利尔药效机理研究的空白，同时将解决因蒙药在药效方面缺乏理论科学依据而不被人们所认可的这一核心科学问题，这必将对蒙药的推广和应用产生一定的贡献。