基于“H2b乙酰化/HMGB1-PTEN通路”介导的T细胞亚群分化差异研究慢性乙肝典型证候“同病异证”的生物学机制

Treatment of chronic hepatitis B (CHB) in Traditional Chinese medicine has its unique advantages. Liver depression and spleen deficiency syndrome and Spleen-stomach damp-heat syndrome, which are typical syndromes of CHB, are different in condition and prognosis, and are related to the significant differentiation between the T-cell subpopulation. We aim to study the biological essence of ‘same disease different syndromes’ in CHB from the perspective of immunology. We have undertaken a major study on national infectious diseases in the previous period and found that: histone HIST2H2BE is the most significant gene of co-expression of the above two syndromes, and studies show that its transcriptional histone H2b can mediate the differentiation of T cell subsets through acetylation of the HMGB1-PTEN pathway. So, we make a hypothesis that: histone H2b acetylation/ HMGB1-PTEN/differentiation of T cells are the immunological basis for the difference between the two syndromes and the prognosis. This study aims to test the acetylation level of H2b and HMGB1-PTEN pathways in peripheral blood of two types of patients with above syndromes of expression changes and differentiation of T cell subsets, and the separation of co culture with macrophages and lymphocytes, Nucleofector transfected siRNA, establish histone H2b inhibition and overexpression of cell model, verify the control path. From the angle of cellular immunity analysis leads to two different TCM type biological essence, provides the objective basis for ‘same disease with different syndromes have different treatment’ in CHB.

慢性乙型肝炎中医药治疗具有特色优势。研究显示,该病代表性典型证候肝郁脾虚与脾胃湿热证病情和预后转归不同,且与T细胞亚群在两证间存在的显著分化差异相关。故拟从细胞免疫学角度,探讨该病“同病异证”的生物学本质。团队前期国家传染病重大专项研究发现:以上两证间共表达调控能力差异最显著的基因为HIST2H2BE,相关研究发现其转录表达的组蛋白H2b可通过乙酰化修饰调控HMGB1-PTEN通路,以介导T细胞亚群分化。提出假说:组蛋白H2b乙酰化/HMGB1-PTEN/T细胞分化差异是导致两证病情和预后不同的免疫学基础。拟检测两证患者外周血H2b乙酰化水平和HMGB1-PTEN通路调控表达变化及T细胞亚群分化情况,并分离共培养患者巨噬细胞和淋巴细胞,Nucleofector转染siRNA,建立H2b抑制与过表达细胞模型,验证上述调控路径,分析导致两证型差异的生物学本质,为该病“同病异证异治”提供客观依据

慢性乙型肝炎（CHB）中医药治疗具有特色优势。研究显示,该病代表性典型证候肝郁脾虚与脾胃湿热证病情和预后转归不同,且与T细胞亚群在两证间存在的显著分化差异相关。故拟从细胞免疫学角度,探讨该病“同病异证”的生物学本质。团队前期研究基础发现两证间共表达调控能力差异最显著的基因为HIST2H2BE,相关研究发现其转录表达的组蛋白H2b可通过乙酰化修饰调控HMGB1-PTEN通路,以介导T细胞亚群分化。本研究拟检测慢性乙型肝炎患者两证型外周血H2b乙酰化水平和HMGB1-PTEN通路调控表达变化及T细胞亚群分化情况。结果显示，H2BE 表达水平在CHB肝郁脾虚证与脾胃湿热证中均升高（P<0.05），且两证型间存在显著差异（P<0.01）。其参与调控的HMGB1/PTEN通路蛋白中，HMGB1、PI3K、PDK1、Akt在CHB肝郁脾虚证与脾胃湿热证均显著升高（P<0.01），且肝郁脾虚证HMGB1、PTEN、PI3K水平高于脾胃湿热证（P<0.05）。在外周淋巴细胞变化中，CHB肝郁脾虚证CD8+T细胞水平降低（P<0.05），而脾胃湿热证CD4+T和CD8+T细胞水平均显著降低（P<0.05），两证型的Th17、Treg、Th17/Treg细胞水平均显著升高（P<0.01），且肝郁脾虚证CD4+T细胞、Th17细胞水平高于脾胃湿热证（P<0.05）。在Th细胞因子中，IL-2、IL-4、INF-ɣ在CHB肝郁脾虚证与脾胃湿热证中均升高（P<0.05），且IL-4、IL-10、INF-ɣ 表达水平在两证型间有显著差异（P<0.01）。整合数据，并构建相关蛋白互作网络图及回归模型，分析发现H2BE与T细胞分化密切相关，且通过调控HMGB1，下调PTEN，促进PI3K/Akt通路的活化，参与CHB肝郁脾虚证和脾胃湿热证外周T淋巴细胞的分化。综上，H2BE基因、CD4+T细胞和Th17细胞以及相应的细胞因子IL-4、IL-10、INF-ɣ可能为肝郁脾虚证和脾胃湿热证免疫差异的生物学标志物。本研究从细胞免疫学角度揭示导致CHB两证型差异的生物学本质，为该病“同病异证异治”提供客观依据，使CHB中医证型的现代医学内涵更加丰富，为中医药在慢性乙型肝炎临床治疗中的应用提供参考，其具有重要的学术价值。