Angiomotin在肾透明细胞癌中异常表达的分子机制及潜在的靶向治疗价值

目前，靶向治疗已成为转移性肾癌的主要治疗手段，但需研制更多针对不同血管生成/细胞增殖信号通路的靶向药物并联合应用，才能取得更好的治疗效果。我们前期首次发现Amot在肾透明细胞癌(ccRCC)细胞系及部分ccRCC组织中异常高表达。本课题拟在此基础上，首先系统分析Amot在ccRCC的异常表达与肾癌侵袭、转移和预后生存的关系，验证Amot可否作为ccRCC新的肿瘤标志物和治疗靶点；进而采用基于RNA干扰的基因沉默技术研究Amot对ccRCC细胞系的影响，并通过RT-PCR、western blot、免疫共沉淀及基因芯片等分析方法，探索其分子机制；最后，通过制备抗Amot的单克隆抗体，探讨其在体内的定位及效应（尤其是针对肿瘤细胞）；力图较为全面的揭示Angiomotin在ccRCC细胞中异常表达的分子机制，并从其对肿瘤细胞的作用角度评估其作为潜在的靶向治疗药物的可能性及价值。

目前，靶向治疗已成为转移性肾癌的主要治疗手段，研制更多针对不同血管生成/细胞增殖信号通路的靶向药物并联合应用，才能取得更好的治疗效果。本课题以Amot在肾癌细胞和肾上皮细胞的不同表达特性为基础，利用基因沉默技术研究 Amot 对肾癌细胞系和肾上皮细胞系的影响，并通过免疫组化、western blot、免疫荧光、免疫共沉淀等分析方法，探索其影响细胞增殖的分子机制。目前已按计划完成了大部分实验。我们发现Amot在肾癌细胞及组织中主要表达在细胞核中，而在癌旁组织及肾小管上皮细胞中，主要表达在细胞浆中；下调Amot明显地抑制了肾癌细胞786-O和肾小管上皮细胞HK-2的增殖，而上调Amot则促进了肾癌细胞ACHN的增殖。有趣的是，我们还发现了Amot和YAP不论是在组织中还是细胞中定位比较相似，而免疫共沉淀实验显示Amot可以与细胞核里的YAP形成复合物并影响下游基因的表达。此外，在786-O细胞中下调Amot的基础上再过表达YAP后可以恢复其对增殖的影响。这些数据均表明Amot有可能是通过肾癌细胞中YAP细胞核内定位及其相互作用来促进其增殖的，初步阐明肾癌中Amot异常表达作用分子机制，为以此为靶点的治疗策略奠定了理论基础。