γδT/Treg细胞平衡在变应性鼻炎和免疫治疗过程中的作用及相关机制的研究

Our previous study and literature report demonstrated that allergic rhinitis (AR) had increased numbers of γδT cells and decreased numbers of regulatory T-cells (Treg) in the peripheral blood, and specific immunotherapy (SIT) resulted in the significant increase in the number of Treg cells. Furthermore, studies have shown that in the procedure of AR and SIT, different γδT cell subsets exhibited with specific expression, accompanied by the production of IL-17 or IFN-γ from γδT cells. Thus, we first propose that γδT cells act as cytokine-producing cells to regulate Treg cell activity via its inflammation-promoting subset or inflammation-inhibiting subset, which may mediate immune deficiency in AR and immune tolerance in SIT. Based on the previous findings, the proposed study will investigate the γδT/Treg cell balance by using Elisa, flow cytometry(FCM), RT-PCR gene scan, cell culture and adoptive transfer both in AR patients who receive SIT (peripheral blood) and AR mouse model (peripheral blood, nasal mucosa), intenting to define two γδT cell subsets: inflammation-promoting subset and inflammation-inhibiting subset, and finally clarify the mechanism of γδT/Treg cell balance. The proposed study will potentially provide an ideal target for immunotherapy in patients with AR.

文献报告和我们前期研究发现，变应性鼻炎（AR）外周血γδT细胞增加、调节性T细胞（Treg）减少，而特异性免疫治疗（SIT）后Treg回升。进一步研究又发现在SIT前后，不同亚家族的γδT细胞优势表达，并伴随IL-17或IFN-γ大量分泌。由此，我们首次提出在AR和SIT中，γδT细胞存在双向调节功能，促炎或抑炎的γδT细胞功能亚群通过分泌IL-17或IFN-γ，与Treg存在某种动态平衡关系，进而介导AR的免疫失调或SIT的免疫耐受。本项目拟进一步从AR接受SIT患者（外周血）和小鼠模型（外周血、鼻黏膜）两个层面，采用FCM、RT-PCR-基因扫描、细胞纯化、扩增和过继转移技术，获得在AR和SIT中，γδT细胞与Treg之间存在动态平衡关系的可靠证据，明确"促炎型"和"抑炎型"γδT细胞功能亚群，探讨γδT细胞影响Treg分化和功能的机制，为提出γδT细胞作为AR治疗新靶点提供科学依据。

背景：γδT细胞是一类以分泌IL-17为主的免疫细胞，在黏膜呈优势表达。研究发现在哮喘中γδT细胞主要分泌IL-17，并且不同的功能亚群细胞发挥相反的调节作用。但在AR中γδT细胞及其不同功能亚群的调节作用不明。.研究内容：本课题通过AR患者及小鼠AR模型观察γδT细胞及其功能亚群细胞、Treg细胞在AR发病机制及免疫治疗中的免疫调节作用。通过收集AR患者免疫治疗前后的外周血提取单个核细胞（PBMC），运用PCR法检测AR患者外周血中Foxp3与TCR VγⅠ~Ⅲ亚家族基因表达水平。构建小鼠AR模型和免疫治疗（ASIT）模型，然后通过PCR法、流式细胞检测法检测小鼠γδT细胞、Vγ1、Vγ4、Treg细胞表达水平。.重要结果及关键数据：第一部分：免疫治疗前Foxp3、TCR VγⅠ~Ⅲ基因相对表达水平明显低于健康对照组，治疗后Foxp3、VγⅢ基因相对表达水平较治疗前明显升高，治疗前Foxp3与VγⅠ、Ⅱ、Ⅲ基因相对表达水平呈正相关，治疗后Foxp3与VγⅢ基因相对表达水平呈正相关。第二部分： AR组、ASIT组中γδT细胞比例均比control组高，而AR组和ASIT组两组之间的比例差异无统计学意义（13.05±0.75% v.s 11.80±1.20%）。Vγ1细胞比例AR组比control组和ASIT组高（56.68±1.18% v.s 21.01±1.14%；56.68±1.18% v.s 25.53±1.23%）。Vγ4细胞比例AR组比ASIT组低（10.85±1.03% v.s 59.89±1.93%）。AR组中γδT细胞和 Treg细胞比例变化成负相关关系（r=-0.576，P=0.025）。ASIT组中两种细胞比例变化呈负相关关系。AR组TCRVγ4+细胞比例变化与Treg细胞比例变化成正相关关系。.科学意义：γδT细胞在AR免疫治疗前后可通过不同的功能亚群发挥不同甚至相反的免疫调节作用，并且与Treg细胞的免疫耐受功能有关，本项目的研究结果丰富了AR的发病机制，γδT细胞有望成为治疗AR的潜在靶点，为AR的“精准治疗”理论基础。