BDI-1单抗导向的超抗原SEA靶向灌注治疗膀胱癌实验研究

As with BCG, superantigen(SAg) SEA is one kind of potent T-cell stimulators and has been shown to be effective against a variety of tumors including bladder carcinoma throuhg MHC-II restricted cytotoxicity. Only a minority of human bladder cancer cells express MHC-II, however, a single application of SAgs will not produce a satisfactory therapeutic effect in the intravesical treatment of bladder carcinoma. Considering recent studies suggest that monoclonal antibody(MAb) targeted SAgs may not exhibit these limitations, and our previous work has: ①prepared a novel monoclonal antibody BDI-1 directed SEA, ②proved its cytotoxicity on bladder cancer cells,③established a xenograft model for bladder cancer in humanrized immunodeficient mice, we therefore aim to investigate the intravesical therapy effect of MAb targeted SEA on bladder cancer and its potencial mechanism.

卡介苗已在膀胱癌灌注治疗中广泛使用，但仍存在诸多限制。超抗原与卡介苗类似，也是一种强大的T细胞激活剂，在灌注研究中也可对膀胱肿瘤产生强大的杀伤作用，但是这种作用缺乏靶向性。同时由于其激活T细胞是MHCⅡ分子依赖的，而仅一部分膀胱癌细胞表达MHCⅡ分子，因此临床应用超抗原灌注治疗膀胱癌存在着靶向性差及抗瘤谱窄等问题。为提高灌注治疗的靶向性，同时，鉴于有研究提示单抗靶向的超抗原激活T细胞不受MHCⅡ分子的限制，因此本研究在：①成功制备抗膀胱癌单抗靶向的超抗原SEA，②体外充分验证其对低表达MHCⅡ分子人膀胱癌细胞的杀伤作用，③以SCID小鼠为载体成功构建人免疫重建皮下荷人膀胱癌复合模型的基础上；通过腹腔注射人淋巴细胞+膀胱灌注人膀胱癌细胞构建免疫重建的荷人膀胱癌原位SCID小鼠模型，考察单抗靶向的超抗原SEA经膀胱灌注靶向治疗膀胱癌的抑瘤效应及潜在机制，从而为临床提供除卡介苗外的另一种治疗选择

膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,其中70%～80%是以复发和进展为特征的浅表性膀胱癌(SBC)，标准的治疗方案是经尿道切除辅以膀胱灌注化疗或免疫治疗（如卡介苗BCG等）。然而当前的膀胱灌注药物不是疗效有限，就是会引起严重的毒副作用；因此迫切需要一种新的膀胱灌注药物。与BCG类似，超抗原SEA也是一种强大的T细胞激活剂，可对包括膀胱肿瘤在内的多种肿瘤细胞产生强大的MHCⅡ分子依赖的杀伤作用。但是由于仅有很少一部分膀胱肿瘤细胞表达MHCⅡ分子，临床单一应用超抗原SEA灌注治疗膀胱癌难以获得满意的疗效。鉴于有研究显示单抗靶向的超抗原不受上述限制，本实验的目的旨在制备单抗靶向的超抗原SEA并在体内外考察其抗膀胱肿瘤活性。. 1我们以木瓜蛋白酶、BDI-1抗体比率1:100制备的Fab段与SEA以5倍抗体过量用SPDP偶联，经surperdex-200柱纯化，成功制备单抗偶联靶向超抗原SEA；并使其保持了良好的T细胞刺激活性和靶向活性。. 2我们分别以CCK-8法、荧光染色法、流式细胞术分析了单抗靶向SEA抑制膀胱肿瘤细胞增殖及诱导凋亡的活性，结果单抗靶向SEA对膀胱肿瘤细胞显示出强大的增殖抑制及凋亡诱导作用，且这可能与其进一步上调肿瘤细胞Bax/Bcl-2比值、增强Caspase3/7酶活性促进其凋亡有关。. 3我们将预处理的SCID小鼠经腹腔注射人淋巴细胞、皮下接种BIU87细胞建立模型；SonoSite彩超检出膀胱癌皮下移植瘤，ELISA法、流式细胞术显示小鼠外周血可检出人IgG、人T淋巴细胞，Real-time PCR及免疫组化显示小鼠脾脏、移植瘤中均可检出人T淋巴细胞的表达。通过上述方法，我们成功建立人免疫重建荷人膀胱癌SCID小鼠复合模型的建立。. 4 我们通过瘤周注射单抗靶向SEA于小鼠，皮下移植瘤体积、瘤体血流均显著减小，提示单抗靶向SEA对膀胱癌皮下移植瘤生长呈强大的抑制作用，这可能与其进一步减少瘤体血流有关。. 通过上述实验，我们认为成功制备了抗膀胱癌单克隆抗体靶向的超抗原SEA，其有膀胱灌注靶向治疗膀胱癌的潜在应用价值。