利用人工锌指蛋白进行多价抗双生病毒的研究

双生病毒是一类极具危害性的植物DNA病毒，每年给我国农业造成巨大经济损失。目前应用于双生病毒的防治方法，包括化学防治、抗病育种和基于植物RNA沉默的基因工程技术进展缓慢，远不能满足农业生产的需求，寻求新的防治方法迫在眉睫。本项目拟以合理筛选的双生病毒保守序列为基础，构建随机人工锌指蛋白（ZiF）库，筛选与双生病毒保守序列具高亲和、高特异结合能力的人工ZiF，并通过转基因评价分析该人工ZiF蛋白抗双生病毒的能力，以期建立一种新的基于人工ZiF的广谱抗双生病毒体系，为双生病毒防治奠定新的理论和实践基础。同时，本研究对其它DNA病毒的防治也具有重要的指导意义，因而具有重要科学研究价值。

本项目根据双生病毒基因组保守序列人工定向设计了可与之特异性结合的人工锌指蛋白，在此基础上构建人工锌指核酸酶，并完成了人工锌指核酸酶对不同双生病毒的抗性分析，建立了多重抗双生病毒技术体系。此外，本研究还结合最近报道的另一种新的人工DNA结合蛋白（TALE）技术，构建了可与基因组保守序列特异性结合的人工TALE蛋白，并获得了表达该人工TALE蛋白的转基因烟草，并完成转基因烟草对不同双生病毒的抗性分析，结果表明转基因本氏烟表达的人工TALE蛋白对3种不同的双生病毒都具有一定的抗性。上述研究表明本研究利用定向设计的人工DNA结合蛋白进行多价抗双生病毒的思路是可行的。本研究结果对进一步建立广谱或多重抗双生病毒具有重要的作用，也同时具有重要的潜在应用价值。本研究已发表SCI论文6篇，另外1篇正在准备中。