鲫鱼肠道LAT2转运氨基酸及其营养调控的分子机理研究

The study of the mechanism of animal intestinal amino acids carrier protein transporting amino acids and their nutritional regulation can help reveal the molecular mechanism of absorption of dietary protein in animal , and thus it has great theoretical and practical significance. This project takes L-type (LAT2)as research object , applies quantitative PCR and Western Blot technology for identification levels of transcription and translation of Crucian carp L-type amino acid transporter-2( LAT2) gene expression, tries to reveal the rule of the activity of Crucian carp LAT2 transporting amino acids.The molecular markers technology is applied to study pertinence between LAT2 Genotype and amino acids transport activity,and the over expression and co-immunoprecipitation technology is uesd for heterologous dimerization of two protein heavy chain 4F2hc and light chain protein LAT2 interaction, in order to reveal the molecular mechanism of LAT2 on amino acids transport activity in the LAT2 gene and protein structure level. Experimental study on the growth of dietary protein and feed additives can clarify the molecular mechanism of crucian carp LAT2 transporting amino acids and their nutritional regulation.The research results of the project can improve the utilization efficiency and reduce nitrogen pollution about the feed protein, and provide a theoretical basis for efficient use of feed protein on genotype fish.

研究动物肠道氨基载体蛋白转运氨基酸及其营养调控的作用和机理对揭示饲料蛋白在体内吸收的分子机理具有重要的理论意义和应用价值。以鲫鱼氨基酸转运载体LAT2为研究对象，利用定量PCR和Western Blot技术从转录及翻译水平上研究鲫鱼LAT2基因的表达变化，揭示鲫鱼LAT2转运氨基酸活性的规律。利用分子标记技术研究LAT2基因型与其转运氨基酸活性的关系，以及过表达和免疫共沉淀技术研究异源二聚体蛋白中重链4F2hc和轻链LAT2蛋白的互作，探讨重链4F2hc对轻链LAT2转运氨基酸活性的影响，从LAT2基因和蛋白结构水平上揭示鲫鱼LAT2转运氨基酸的分子机理。利用生长实验研究日粮蛋白及饲料添加剂对鲫鱼LAT2转运氨基酸的调控作用，阐明鲫鱼LAT2转运氨基酸及其营养调控的分子机理。项目可为提高饲料蛋白的利用效率及降低氮污染，获得高效利用饲料蛋白基因型鱼类提供理论基础。

研究动物肠道氨基载体蛋白转运氨基酸及其营养调控的作用和机理对揭示饲料蛋白在体内吸收的分子机理具有重要的理论意义和应用价值。以鲫鱼氨基酸转运载体LAT2为研究对象，克隆的到了鲫鱼LAT2基因全序列，并采用定量PCR技术从转录水平上研究了鲫鱼LAT2基因的表达变化，揭示鲫鱼LAT2转运氨基酸活性的规律。利用生长实验研究日粮蛋白及饲料添加剂对鲫鱼LAT2转运氨基酸的调控作用，阐明鲫鱼LAT2转运氨基酸及其营养调控的分子机理。结果包括：（1）克隆获得了鲫鱼LAT2基因全长序列；（2）前肠和中肠LAT2基因mRNA表达水平最高，而在肝脏和肾脏中LAT2基因mRNA的表达量最低；（3）在37和42 %蛋白水平组发现了的LAT2基因表达量最高，而22%蛋白水平组的表达最低。27和32%蛋白水平组LAT2基因表达量居中。鱼粉蛋白来源组发现了的LAT2基因表达量最高，而豆粉蛋白来源组的表达最低。鱼粉豆粉混合组LAT2基因表达量居中；（4）以2.5g/kg的剂量添加丁酸梭菌在前肠中有最高的表达量。而不添加丁酸梭菌的对照组以及以7.5g/kg的剂量添加丁酸梭菌组表达量最低。以1.0 g/kg的剂量添加丁酸梭菌表达量居中；（5）采用添加0.5%晶体Lys的饲料喂食，在3小时、5小时和8小时后LAT2基因在鲫鱼前肠中的表达量显著增加。本项目可为提高饲料蛋白的利用效率及降低氮污染，获得高效利用饲料蛋白基因型鱼类提供理论基础。目前已经发表论文2篇，并有1篇SCI论文在终审中。已经按照项目计划顺利完成任务。