间质胶原酶基因脂质体体内转基因治疗大鼠肝钎维化研究

本课题运用DNA重组技术，构建了含有特定检测序列的大鼠间质胶原酶真核细胞表达质粒研究其对肝纤维化的影响。在体外实验中通过脂质体介导将其转化进培养的3T3细胞中，运用RT-PCR及WesternBlot的方法，可发现该质粒的表达，运用明胶酶谱法发现其表达产物具有降解胶原的活性。在体内实验中，利用糖化多聚赖氨酸将该质粒靶向导入模型动物肝脏内，运用原位杂交和免疫组化技术，也可观察到该质粒的表达，通过对肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的检测及病理形态学的观察，发现该质粒在体内对Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解作用有限，对病理形态学的影响也不明显。该质粒在体内的研究结果不同于体外，提示在肝纤维化发生过程中，肝脏内胶原等细胞外基质的沉积与降解存在着更为复杂的调控机制。