血小板GPIb-IX结合VWF功能的调控及其信号转导机制研究

血小板GPIb-IX与损伤血管内皮表面VWF的结合是血栓形成的起始步骤，而经过信号转导途径，导致 GPIIb/IIIa的活化则是形成血栓的关键环节。申请人及其他学者研究证实，14-3-3蛋白和血小板骨架系统可调控GPIb-IX的VWF结合功能，但机制尚未阐明。GPIb-IX-VWF结合的信号如何向血小板内转导的，也尚不清楚。申请人最近报道了GPIbα559位磷酸化的丝氨酸在调控VWF结合功能、骨架蛋白分布等方面的作用，本研究将首先探明调节该位点磷酸化的蛋白激酶，揭示血小板内通过蛋白激酶活性的变化，调节14-3-3、骨架系统等调控GPIb-IX的VWF结合功能的分子机制，进而研究探明VWF与GPIb-IX结合所介导的GPIIb/IIIa活化的早期信号转导途径。本研究将不仅为血小板的基础研究提供资料，有助于相关疾病发病机制的认识和新的防治措施研究，成果还可能用于血栓、出血性疾病药用价值的探讨。

血小板GPIb-IX与损伤血管内皮表面VWF的结合是血栓形成的起始步骤，而经过信号转导途径，导致 GPIIb/IIIa的活化则是形成血栓的关键环节。申请人及其他学者研究证实，14-3-3蛋白和血小板骨架系统可调控GPIb-IX的VWF结合功能，但机制尚未阐明。GPIb-IX-VWF结合的信号如何向血小板内转导的，也尚不清楚。本研究首先探明调节该位点磷酸化的蛋白激酶，揭示血小板内通过蛋白激酶活性的变化，调节14-3-3、骨架系统等调控GPIb-IX的VWF结合功能的分子机制，进而研究探明VWF与GPIb-IX结合所介导的GPIIb/IIIa活化的早期信号转导途径。. 经过本项目的实施，取得了如下重要结果：研究确定蛋白激酶A是磷酸化GPIbα 559位点丝氨酸的蛋白激酶；研究确定蛋白激酶通过调节相应位点的磷酸化及其与14-3-3ζ的结合，调控GPIb-IX-VWF结合功能的机制；研究探明PKA激活剂调控GPIb-IX VWF结合功能的机制；研究确定14-3-3ζ与ABP在GPIbα 559位点的结合存在磷酸化依赖的竞争关系，探明这种竞争关系在调控GPIb-IX的表面表达、和骨架系统连接等方面的作用和机制；研究探明肌动蛋白及骨架系统调控GPIb-IX的VWF结合功能的机制，探明蛋白激酶调节的GPIbα559位点磷酸化在其中的作用机制；研究确定ABP与GPIbα胞内段的连接是GPIb-IX-VWF结合早期信号转导的关键，研究探明骨架系统在信号转导中的作用；研究探讨PI3K、SFKs和RIP3通过GPIbα和ABP与骨架系统的连接是转导GPIb-IX-VWF结合早期信号的关键；抗GPIbα抗体、药物等可导致血小板凋亡，从而在免疫性血小板减少性紫癜（ITP）等血小板减少疾病发生中起关键作用。. 综上，本研究按原计划达到了预期研究目标，并适当拓展、延伸了研究内容，取得了超出预期的研究成果。本研究揭示了血小板GPIb-IX在血栓形成的起始阶段的关键作用及其调控机制，不仅为血小板的基础研究提供资料，有助于相关疾病发病机制的认识和新的防治措施研究，成果还可能用于血栓、出血性疾病治疗药物的研制，对血栓与出血性疾病具有重要基础和应用研究意义。