乳腺癌细胞侵袭转移过程中HIF-1 的作用及其靶蛋白的研究

本课题选用具有HIF-1a 高表达和高侵袭转移能力的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231为研究对象, 并以几个其他人乳腺癌细胞系作参照，采用siRNA干扰方法, 对比HIF-1a 蛋白表达和被阻断状态下，细胞中差异蛋白的类型和功能。应用双向凝胶电泳和质谱技术分离、寻找并鉴定差异蛋白。用Western blot 或ELISA验证差异蛋白的准确性。对HIF-1a? 干扰细胞中出现的缺失或表达蛋白，选择1-2个可能与肿瘤侵袭转移表型相关,但功能尚未完全明确的靶蛋白,经构建正显性或负显性构建体诱导或阻断高表达，探讨这些蛋白质对细胞生长、血管形成、侵袭等生物学行为的影响. 同时采用免疫组化方法在部分临床乳腺癌标本中验证体外研究的发现, 从而进一步确立HIF-1在乳腺癌细胞生长、血管形成、侵袭和转移中的作用靶点，为揭示乳腺癌的发生、发展和演进的机制，并提供有效合理的治疗靶点提供生物学依据。