冠心病伴慢性牙周炎患者血浆中的生物标记物的研究

冠心病是多因素疾病，除高血压、糖尿病等危险因素外，中、重度牙周炎被证明是其独立危险因子，生物学机制尚不清楚;而且两者关系的研究常局限于几个蛋白。因此本研究利用血浆蛋白组学探讨慢性牙周炎在冠心病中的作用。采用蛋白组学非标记定量分析冠心病患者伴或不伴有慢性牙周炎血浆中的蛋白，对其消化后进行LC-MS/MS，通过Decyder MS TM软件对LC-MS数据的非标记定量分析，对肽段相应的蛋白进行定量，获得两者血浆中的差异表达蛋白谱，并验证这些蛋白；同时检测这些蛋白和AL、BOP和PD的关系，由此证明慢性牙周炎相关蛋白可作为生物标记分子预测患者将来发生冠心病的危险性，为深入研究慢性牙周炎和冠心病相关的生物学机制奠定基础；希望将来把这些生物标记分子制备成抗体，用在临床椅旁实时监测慢性牙周炎患者血浆中这些蛋白的动态变化，以提高临床医生判断冠心病发生的能力，从而改善对病人的服务，提高其生存质量。

本研究采用蛋白组学非标记定量方法分析冠心病（CHD）患者伴或不伴有慢性牙周炎（CP）血清中的差异蛋白，旨在找出CHD和CP的内在关系。首先通过iTRAQ结合LC-MS/MS的方法进行CHD组、CP组、CP+CHD组和 Control组患者血清的蛋白组图谱比较，数据库计算的FDR为1%，得到了596个特异性蛋白的图谱，并进行了GO和KEGG分析。同时选择差异蛋白（1.2倍差异代表P < 0.05）再做进一步的分析，首先分别找出CP组/Control组，CHD组/ Control组和CP+CHD组/Control组之间显著差异的蛋白质（P<0.05），然后选择这三个组组之间显著性的交集蛋白；最后在这个交集的蛋白基础上，选择蛋白在CP组，CHD组和CP+CHD组同时为上调或同时为下调，并且在CP+CHD组的调控幅度大于其他的两组。结果发现CP组和Control组之间、CP+CHD组和Control组之间、CHD组和Control组之间分别有59个、68个和71个差异蛋白，而在CP组、CP+CHD组和CHD组间有14个差异蛋白，其中同时上调或下调的蛋白为9个，上调的蛋白分别为beta球蛋白、触珠蛋白（HP），血管生成素样蛋白-6（ANGPTL6），血红蛋白亚基delta、载脂蛋白C-IV、载脂蛋白C-I、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、载脂蛋白C-III；下调的戴白为组织因子途径抑制物。最后采取ELISA方法检测了不同组患者血清中HP和ANGPTL6的表达水平，验证了HP和ANGPTL6在CP+CHD组患者血清中的表达水平最高，和蛋白组学得到的结果一致。由此证明慢性牙周炎患者血清中的这9个蛋白也许可以作为生物学标记分子预测患者将来发生冠心病的危险性，为深入研究慢性牙周炎和冠心病相关的生物学机制奠定基础，例如ANGPTL6在人牙周膜细胞中的信号转导通路；希望将来把这些生物标记分子制备成抗体，用在临床椅旁实时监测慢性牙周炎患者血清中这些蛋白的动态变化，以提高临床医生判断冠心病发生的能力，从而改善对病人的服务，提高其生存质量。