应用CD52单抗（Campath）选择性清除淋巴细胞对克罗恩病的干预作用及其机制研究

肠黏膜免疫系统对肠道共生菌的免疫耐受丧失是克罗恩病（CD）发病的核心机制。肠黏膜免疫系统调控免疫耐受的主要机制包括黏膜T淋巴细胞的自发性凋亡和调节性T细胞（Tregs）的作用。CD52单抗（Campath）能选择性清除淋巴细胞和诱导Tregs的产生。本课题组前期研究发现CD52单抗能有效缓解CD模型小鼠肠道炎症，初步发现与其能够有效减轻肠黏膜淋巴细胞浸润有关。在前期研究基础之上，本研究拟以CD模型小鼠及CD患者炎症肠组织为研究对象，结合离体和在体实验，运用免疫学、分子生物学等技术，观测CD52单抗体内作用的持续时间；研究不同剂量CD52单抗对CD模型小鼠的治疗作用及其主要作用机制；并评估长期应用CD52单抗的安全性；进一步研究人源化CD52单抗-阿伦单抗对CD患者炎症肠组织的作用；探索阿伦单抗对CD患者肠黏膜免疫系统的调控作用及其作用机制。为CD52单抗应用于临床治疗CD提供理论基础。

肠黏膜免疫系统异常活化是克罗恩病发病的核心机制之一。肠黏膜免疫系统调控免疫耐受的主要机制包括黏膜T 淋巴细胞的自发性凋亡和调节性T 细胞（Tregs）的免疫调控作用。CD52 单抗能选择性清除淋巴细胞和诱导Tregs 的产生。本课题组前期研究发现CD52 单抗能有效缓解克罗恩病模型小鼠肠道炎症，与其能够有效减轻肠黏膜淋巴细胞浸润有关。在前期研究基础之上，本研究运用克罗恩病模型小鼠，观测CD52 单抗体内作用的持续时间；研究不同剂量CD52 单抗对克罗恩病模型小鼠的治疗作用及其主要作用机制；并评估长期应用CD52 单抗的安全性；运用克罗恩病患者炎症肠组织为研究对象，结合离体和在体实验，研究人源化CD52单抗对克罗恩病患者炎症肠组织的作用；探索人源化CD52单抗对克罗恩病患者肠黏膜免疫系统的调控作用及其作用机制。为CD52单抗应用于临床治疗克罗恩病提供理论基础。..本课题研究结果表明：CD5单抗能够有效的清除外周血和肠粘膜的淋巴细胞，作用效果第3周最强，作用时间长达8周。确定CD52单抗重复给药的时间为3周1次。对于克罗恩病模型小鼠，确定20μg的剂量能够达到最小剂量最优的治疗效果，表现在炎症因子显著减少、肠道炎症程度减轻。CD52单抗对不同表型的肠黏膜淋巴细胞一定的作用，表现在肠黏膜CD3+、CD4+和CD8+细胞的数量显著减少，其机制可能与CD52单抗能够显著诱导肠黏膜淋巴细胞凋亡和Treg的分化有关。应用CD52单抗治疗后，连续8周的观测发现CD52单抗对小鼠的肺、心脏、肝脏及肾脏等器官无明显损伤作用。人源化CD52单抗显著抑制克罗恩病患者肠黏膜组织促炎因子的表达，能够影响肠黏膜淋巴细胞数量的变化，主要表现在显著抑制CD3+、CD4+和CD8+细胞的数量，促进克罗恩病患者肠黏膜淋巴细胞凋亡及诱导Tregs的产生。本研究系统的揭示了CD52单抗的作用效果、可能的作用机制以及毒副作用，为揭示克罗恩病的病理生理、探寻新的治疗靶点和治疗方法提供了实验依据。