基于衰老标记蛋白30和自噬交互介导氧化应激探讨七宝美髯丹对小鼠皮肤光老化的作用机制

Skin aging is the focus of medical cosmetology.Research found out that oxidative stress injury which enhanced with aging increased the express of reactive oxygen species in skin cells, as a result, causing skin aging. Due to the theory of Chinese medicine, deficiency of liver-kidney and essence is an important incentive for the formation of skin aging. While in clinical practice, liver-kidney nourishing and essence strengthening is one effective treatment of delaying skin aging. A Chinese medicine named QI Bao Mei Ran Dan is a classic Chinese prescription for such application. With the function of nourishing liver-kidney and strengthen essence, it can effectively treat the skin aging, how ever, pharmacology and mechanism of this medicine had yet to be further developed. Based on the pervious research by us, we would build three mouse photoaging models: Ultraviolet, Ultraviolet with SMP30 silencing, Ultraviolet with SMP30 knockdown. At the same time, we pretreat the models by QI Bao Mei Ran Dan. To acquire cultured rat skin fibroblasts. We detect the mark of autophagy and aging during the SMP30 mediated skin aging in primary fibroblast which getting from the mouse models. These researches should explore the target and molecular mechanism of QI Bao Mei Ran Dan in reducing the photoaging skin。

皮肤衰老影响美观，是医学美容关注的热点。研究发现氧化应激伴增龄而增强，促使皮肤细胞活性氧堆积，是导致内外源性皮肤衰老的共同机制。中医认为肝肾亏虚、精血耗伤是皮肤衰老的重要原因，滋补肝肾、填精养血是延缓皮肤衰老的有效治法。古方七宝美髯丹，临床应用多年，具有滋补肝肾、填精养血之功效，是体现该治法的方药，并能抑制氧化应激，促进皮肤年轻化，但作用机制有待深入。本项目基于已结题青年基金成果（SMP30与细胞自噬交互作用共同抑制氧化应激损伤，延缓细胞衰老），建立小鼠皮肤光老化模型，同时七宝美髯丹干预，并培养模型鼠原代皮肤成纤维细胞，借助基因沉默、基因敲除等手段，通过免疫荧光、分子生物学、透射电镜等技术检测基于SMP30与细胞自噬交互介导氧化应激，调控衰老、自噬等相关指标，旨在研究七宝美髯丹对皮肤光老化的作用机制，为七宝美髯丹的临床应用提供科学依据。

皮肤衰老影响美观，是医学美容关注的热点。研究发现氧化应激伴增龄而增强，促使皮肤细胞活性氧堆积，是导致内外源性皮肤衰老的共同机制。中医认为肝肾亏虚，精血耗伤是导致皮肤衰老的重要原因，滋补肝肾、填精养血是延缓皮肤衰老的有效治法。七宝美髯丹出自《医方集解》，临床运用多年，具有滋补肝肾、填精养血之功效，并能抑制氧化应激，促进皮肤年轻化，但作用机制有待深入。本项目基于SMP30和自噬交互介导氧化应激，延缓皮肤衰老，建立人皮肤和小鼠皮肤衰老模型，同时七宝美髯丹干预，通过数据挖掘、免疫荧光、分子生物学等技术检测衰老等相关指标，旨在研究七宝美髯丹对皮肤衰老的作用机制，为七宝美髯丹的临床应用提供科学依据。重要研究结果是：.1.高表达的SMP30能够抑制SA-β-gal和ROS的表达，同时上调了SOD的活性，它可能在H2O2诱导的NHSF衰老中扮演着抗皮肤衰老的作用，可能是又一个全新的调控皮肤衰老相关的重要靶分子。.2.过氧化氢诱导的人皮肤成纤维细胞衰老模型中，SMP30表达明显下调，细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ受到一定抑制，继而可能进一步促使人皮肤成纤维细胞提前衰老。.3.H2O2诱导的NHSF衰老模型中，细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ、抗凋亡基因Bcl-2的表达以及细胞增值活性明显下调，促凋亡基因Bax活性明显增强；七宝美髯丹干预后，提高了衰老的人皮肤成纤维细胞增值活性，激活了自噬相关蛋白LC3Ⅱ和抗凋亡基因Bcl-2的表达，减少了促凋亡基因Bax的活性，继而延缓皮肤衰老。.4.通过网络药理学研究七宝美髯丹延缓皮肤衰老的PPI核心蛋白靶点，其中氧化应激相关靶点SOD1、CAT，炎症细胞因子TNF、PTGS2、IL-6、IL-1A、IL-1B，细胞凋亡有AKT1、CASP3、CASP8、CASP9，以及表皮生长因子EGF、EGFR，胶原相关蛋白COL1A1、COL3A1以及基质金属蛋白酶MMP1影响皮肤皱纹深浅；血管内皮生长因子VEGFA参与皮肤血管新生。七宝美髯丹含药血清可抑制氧化应激所致人皮肤成纤维细胞衰老相关β-半乳糖苷酶的表达，降低人皮肤成纤维细胞中TNF-α、MMP1蛋白的表达。七宝美髯丹治疗可能通过增加SMP30的表达来激活SOD活性，抑制紫外线照射小鼠皮肤组织ROS产生以及胶原纤维和弹性纤维损伤来改善皮肤光老化。表明七宝美髯丹可能通过抗炎、抗氧化应激、调整胶原代谢延缓皮肤衰老。