HPV16E6诱导HMGB1释放促进宫颈癌侵袭转移机制的研究

The secretion of HMGB1 from the cancer cells plays an important role in the invasion and metastasis of cancer. The acetylation of HMGB1 was found to be an important factor in the process of its secretion. Our previous studies suggested that the HPV 16 E6 was related to the overexpression of HMGB1. Other authors have reported that the HPV 16 E6 could bind to the acetyltransferase-active p300, however, whether the HPV16 E6 could facilitate the secretion of HMGB1 by the pathway of p300 is still not sure. Our research will apply the technologies like the quantum dot probes/confocal fluorescence imaging technology, western blot, immuno- precipitation, mass spectrographic analysis, to observe the interaction between E6-p300-HMGB1, HMGB1-CRM1 and the effect of E6 to the downstream signaling molecules of HMGB1/RAGE in the levels of in overall, cells and molecular. With all these studies, we aim to investigate the relationship between the E6-HMGB1-RAGE, look for the possible signal pathway of HMGB1 in the invasion and metastasis of cervical cancer, to finially prove in defferent ways our hypothesis: the HPV16 E6 promotes the invasion and metastasis of cervical cancer by induce the active secretion of HMGB1 in cancer cells, in order to provide a new direction and target to the treatment of cervical cancer.

高迁移率族蛋白1(HMGB1)外释放是肿瘤侵袭转移的关键步骤，其乙酰化修饰是影响外释放的重要因素。前期我们发现，人乳突瘤病毒（HPV）16 E6与HMGB1过表达相关。文献报道，E6能与具有乙酰转移酶活性的p300结合，但E6能否通过p300促进HMGB1的外释放？目前尚不清楚。本项目采用量子点探针/共聚焦荧光成像、Western blot、免疫沉淀、质谱分析等技术，从整体、细胞和分子层面，观察E6-p300-HMGB1相互作用、HMGB1-CRM1（染色体区域维持蛋白）相互作用、E6对HMGB1/RAGE（晚期糖基化终产物受体）下游信号分子的影响，揭示E6-HMGB1-RAGE之间的关系，探讨HMGB1在宫颈癌转移中的信号传导机制，多角度证实我们提出的"HPV16 E6通过诱导癌细胞中HMGB1的主动释放，促进宫颈癌细胞的侵袭转移"的研究假说，为宫颈癌的治疗提供新思路和新靶点。

子宫颈癌是全球女性中发病率仅次于乳腺癌的妇科恶性肿瘤，尽管手术技巧、放疗技术和化疗药物的不断改进，但中晚期宫颈癌的治疗效果无根本提高。造成治疗困难的主要原因之一是宫颈癌的侵袭和转移。因此，寻找侵袭转移的关键环节和关键分子并予以阻断，以改善患者的预后显得十分紧迫和必要。.大量研究表明高迁移率族蛋白B1 (High mobility group box1, HMGB1) / 晚期糖基化终产物受体(Receptor for advanced glycation end production, RAGE)是一条重要的细胞传导通路，参与肿瘤侵袭转移的多个环节。我们的前期研究发现，HMGB1 的表达水平与宫颈癌的侵袭及复发有关，随着宫颈病变程度的加重HMGB1 的阳性率与HPV16 E6 检出率逐渐增高，两者呈正相关。故而我们采用量子点探针/共聚焦荧光成像、Western blot、免疫沉淀、质谱分析等技术，从整体、细胞和分子层面，观察E6-p300-HMGB1相互作用、E6对HMGB1/RAGE（晚期糖基化终产物受体）下游信号分子的影响，揭示E6-HMGB1-RAGE之间的关系，探讨HMGB1在宫颈癌转移中的信号传导机制。.本研究结果显示，宫颈癌中HPV16E6 DNA病毒载量拷贝数与HMGB1蛋白的表达量呈正相关， HPV16E6通过抑制细胞核中p300的表达以及p300的乙酰化酶活性，促进癌细胞的增殖的同时促进HMGB1的外释放，大量外释放的HMGB1与其受体RAGE结合激活下游信号通路，促进宫颈癌细胞转移。此外，我们研究发现宫颈癌中HMGB1和TLR4表达呈正相关，HMGB1可通过激活TLR4-NFкB和TLR4-PI3K/Akt信号通路，促进宫颈癌细胞侵袭和迁移能力。HMGB1抑制剂正丁酸钠可以通过提高组蛋白乙酰化水平，抑制人宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移，促进其凋亡，可能是一种有效的抗宫颈癌药物。运用生物信息学分析，我们研究发现MiR-142 通过靶向HMGB1的3’-UTR区域，促进宫颈癌细胞的增殖和侵袭转移，故MiR-142可能成为有效的宫颈癌治疗靶点。.综上所述，本研究为系统认识HMGB1 在宫颈癌侵袭转移中的作用，解析子宫颈癌转移的分子机理具有重要的理论意义，为宫颈癌的治疗提供新思路和新靶点，为临床上开发出针对宫颈癌患者全新有效的治疗策略提供重要的实验依据。