幽门螺杆菌感染与人类白细胞抗原II基因多态性的协同作用对Graves病易患性的影响及机制研究

Graves disease (GD) is the most common autoimmune diseases, our previous study found that Helicobacter pylori (HP), especially cytotoxin-associated gene A (cytotoxin associated gene A, CagA) positive HP strain and the HLA-DQA1 * 0201-negative or HLA-DQA1 * 0501-positive increases the risk of GD. The project intends to further detect thedistribution characteristics of HLA-II gene polymorphism in GD patient by using gene chip technology. CagA gene in full length of HP isolated from the gastric mucosa of patient sufferred from GD was cloned and its molecular characterization Was analyzed．Then，referring to the sequence of CagA gene of HP，the CagA gene knocked-out mutant strain HP CagA was constructed via the method of homologous recombination．The biology fimctious and the virulent effects on host cell of CagA were preliminarily assessed via comparation of biological characteristics between wildtype strain HP and isogenic mutant HP CagA, and of the in vitro effects on the proliferation and apoptosis of thyroid follicular epithelial cells induced by two strains．The patients were divided and given HP eradication therapy.Their effects on GD outcomes were compared in order to provide a new idea and target for treatment of GD.

Graves病（Graves disease，GD）为最常见的自身免疫性疾病，本课题组前期研究发现，幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP），尤其是细胞毒素相关基因A（cytotoxin associated gene A，CagA）阳性的HP菌株和HLA-DQA1*0201阴性或HLA-DQA1*0501阳性的协同作用增加了GD的患病风险。为全面深入了解HP和HLA-II的协同作用对GD易患性的影响，本项目拟采用基因芯片技术全面分析GD患者HLA-II的遗传背景特征，分离培养GD患者所感染的HP菌株并克隆其CagA基因全长，构建CagA基因敲除突变株，比较遗传背景相同的野生株与突变株生物学特性差异及其对甲状腺滤泡上皮细胞增殖和凋亡的影响，探讨其可能的致病机制，并分组对比分析根除HP治疗对GD病情转归的影响，以期为GD的治疗提供新思路和新靶点。

Graves病（Graves disease, GD）为最常见的自身免疫性疾病，发病率约0.02%，可导致全身多系统并发症。近年关于幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）是否为GD病因一直有争议。本项目采用Sanger法DNA测序技术、PCR-SSP和基因芯片等方法全面分析 GD 患者 HLA II、Ⅲ 的遗传背景特征，共检测了288例研究组和112例对照组的56个基因位点。本研究发现HP感染和GD具有相关性，HLA DPB1 *0501、HSP70-2+1267位点GG基因型和G等位基因可能为GD患者的易感基因；HLA DRB1*0701、HLA DRB1*1202、HLA DRB1*1302、HLA DQB1*0501、HLA DQB1*0503可能为GD患者的保护基因。HP感染与HLA II不同的基因型组合对Graves的患病风险的影响不同，HP感染和HLA DRB1*0701阴性、或HLA DRB1*1202阴性、或HLA DRB1*1302阴性、或HLA DQB1*0501阴性、或HLA DQB1*0503阴性和HLA DPB1*0501阳性基因型的组合可提高GD的患病风险。本研究成功分离培养 GD患者所感染的HP菌株并克隆其cagA 基因全长，成功构建了 cagA 基因敲除突变株。本项目经过2年的分组对比分析发现，GD患者根除HP治疗2年后甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、甲状腺球蛋白抗体（TGAb）滴度较正常对照组明显降低，提示根除HP治疗有利于患者病情的转归。本项目研究成果“HP感染与不同的HLA II基因型组合，对GD患病风险的影响不同”，有助于解释不同地区和人群HP感染与GD相关性结论多样化的现象，为进一步开展HP致病学和GD病因学以及遗传学研究提供了一定的实验和理论依据。本项目关于根除HP有利于降低甲状腺自身抗体滴度的研究成果有望为GD的防治提供新思路和新靶点。