凋亡调控分子BclGL诱导Treg细胞凋亡在SLE发病中的作用及其分子机制

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)凋亡增加是系统性红斑狼疮(SLE)免疫失衡的关键环节，但其发生机制尚不明确。BclGL是新鉴定的对T细胞具有重要促凋亡效应的IFN-α诱导基因。前期研究我们发现BclGL在SLE患者外周血Treg中表达上调，且与Treg凋亡水平正相关，我们推测BclGL可通过诱导Treg凋亡促进SLE免疫失衡。本项目拟采用慢病毒载体上调或干扰Treg中BclGL表达，体外分析其对Treg免疫抑制功能的影响，再通过血清共培养及阻断实验探讨IFN-α诱导BclGL表达促进Treg功能受抑的可能机制，并运用启动子分析及凝胶迁移实验筛选其上游转录因子。在此基础上，进一步运用狼疮鼠Treg回输及IFN-α阻断实验，在体验证IFN-α诱导BclGL表达对Treg的负性调控机制及对SLE疾病转归的影响。本研究将为今后SLE临床治疗提供新的思路和干预靶标。

1.本研究证实了SLE患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs细胞频率较正常对照明显减少，细胞凋亡显著增多。表达谱基因谱显示SLE患者Tregs凋亡信号通路明显紊乱，细胞趋于凋亡部分归结于压力应激、DNA损伤及细胞因子刺激。芯片结果发现BclGL基因表达明显上调。通过多样本临床验证：SLE患者Tregs细胞凋亡率及BclGL 表达量较正常对照均明显升高，二者正相关，且Tregs BclGL 表达量与SLE疾病活动度正相关。2.构建人及小鼠BclGL慢病毒过表达及干扰载体并成功转染Tregs细胞，证实BclGL过表达可促进细胞凋亡而降低其免疫抑制效应，而干扰其表达可提高Tregs的抑制效应。3. SLE血清中IFN-α水平较正常对照明显升高，与Tregs 细胞凋亡率及BclGL表达量正相关。SLE血清刺激可上调Tregs细胞中BclGL 表达、促进其凋亡而降低其免疫抑制效应；阻断IFN-α可降低BclGL表达，并减弱SLE血清对Tregs细胞的促凋亡效应。4.人BclGL基因启动子分析发现：BclGL基因具有两个不同部位启动子区域，其一位于上游5’端非编码区-94bp～-357bp处，具有天然启动活性，而第二个启动子则受到IFN的转录调控，其活性区域集中于第一个外显子内部+238bp～+348bp区域。5. 尾静脉注射IFN-α阻断剂可降低BW狼疮鼠Tregs细胞凋亡及BclGL 表达。慢病毒载体转染的BW小鼠脾脏Tregs细胞过继性回输BW狼疮鼠，可延长 BW的生存时间，降低小鼠疾病活动及促炎因子的释放，而增加抗炎因子的产生，BclGL干扰后的Tregs细胞回输对BW鼠疾病的改善最为明显。本课题初步证实了BclGL在诱导Treg凋亡促进SLE免疫失衡中的重要作用及其分子机制，为今后SLE临床诊断及治疗分子靶标的筛选提供理论指导。6.本课题目前已发表论文4篇，其中SCI 发表论著1篇，另1篇已投送Journal of Investigative Dermatology (under review)；同时已在撰写另2篇SCI论著。统计源核心期刊已发表3篇，2篇为中华皮肤科杂志。参加了第6届亚洲自身免疫性疾病大会（香港）行分组发言；参加了第三届世界免疫疾病与治疗大会(WCIT-2013)行大会发言。参加了第二届东亚皮肤科大会/国际皮肤病遗传学论坛，会议论文及壁报